2024-04-22 11:24:55, NanoTemper 诺坦普科技(北京)有限公司
吸附
原因
由生物分子外部的带电残基或疏水性区域与毛细血管的玻璃表面的相互作用造成的,形成“双峰”样荧光扫描图,如下图。吸附时,Target分子不能自由移动,影响热泳动及结果。因此,当出现吸附时,需进行优化后再分析结果。(若只有个别毛细管,可以去掉对应的点即可)。一定要在pretest界面解决了吸附,再向后进行binding affinity。
图示:正常扫描结果(左)和吸附结果(右)
解决办法
1 更换毛细管:从标准毛细管(MO-K022)更换到优化型毛细管(MO-K025)通常是避免吸附的最快解决方案。
2 添加剂防止吸附(一次只尝试一种)
• Tween-20 (0.05 %)
• Pluronic F-127 (0.1 %)
• BSA (0.5-1 mg/ml)
• 0.1 % PEG 8000
• DM (0.05 %)
• NP-40 (0.05 - 0.1 %)
• Triton X-100 (0.05 %)
• Brij 35 (0.01 %)
• stabilizing amino-acids
(20 mM Arginine or Proline)
• charged polymers (poly-lysine or spermidine)
3 当聚集和吸附同时存在时,先解决聚集问题
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Monolith X 分子互作检测仪
产品优势
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· 检测一个Kd仅需10min
· 可在裂解液中检测亲和力,无需纯化样品
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