赛默飞无氯仿提取RNA解决方案来了！

1977年，科学家 Axel Ullrich 和他的同事们提出使用异硫氰酸胍（Guanidine Thiocyanate）用于 RNA 的分离纯化，至1990 年，优化该方法后，推出商业化的 TRIzol 试剂。

赛默飞TRIzol试剂是一种即用型试剂，用于在1小时内从人类、动物、植物、酵母或细菌来源的细胞和组织样本中提取高质量的总RNA（以及DNA和蛋白质），TRIzol试剂在样本匀浆化时，可以破坏细胞，溶解细胞组分，同时高效的抑制RNA酶的活性，从而维持RNA的完整性。

在样本进行匀浆化时，加入0.2mL氯仿或者0.1mL BCP，进行RNA提取。

图1. 操作流程示意图，详细步骤如下：

1. 加1mL TRIzol试剂，裂解样本，室温孵育5min。

2. 加0.2 mL氯仿或 0.1 mL BCP，振荡混匀，孵育3min。

3. 在4°C下12000×g离心样本15min。

4. 取约500μL上清液至新样本管中。

5. 加等样本体积的异丙醇，颠倒混匀，在4°C下孵育10min。

6. 在4°C下12000×g离心10min，弃上清。

7. 加1mL 75%乙醇，重悬沉淀，短暂涡旋样本，在4°C下7500×g离心5min，弃上清液。此步骤重复一次。

8. 干燥5-10min，加20-50μL RNase-Free水，在55°C的水浴孵育10min。

图2. Nanodrop检测RNA的产量和纯度

图3. Agilent 2100测定RNA完整性和计算RIN指标

图4. 对提取RNA进行RT-qPCR检测内参基因：GAPDH和ACTA₂，说明BCP提取的RNA，与氯仿相比，内参基因表达量无显著差异。

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