食品及饲料中伏马毒素的检测-柱前衍生及柱后衍生法

✦ 关于伏马毒素  ✦

    伏马毒素 (Fumonisin FB) 是一种霉菌毒素，是由串珠镰刀菌产生的代谢产物。主要污染粮食及其制品，并对某些家畜产生急性毒性及潜在的致癌性，已成为继黄曲霉毒素之后的又一研究热点。目前我国现行标准《食品安全国家标准食品中真菌毒素限量》（GB2761-2017）尚未涉及伏马毒素的限量，不过在《饲料卫生标准》（GB 13078—2017）规定了部分饲料原料和饲料产品中的FB1和FB2总量的限量标准。其中饲料原料玉米及其加工产品、玉米酒糟类产品、玉米青贮饲料和玉米秸秆中伏马毒素的限量为 60 mg/kg，其他饲料产品中伏马毒素的限量在5～50 mg/kg。

✦ 关于检测方法✦

GB 5009.240-2023 食品安全国家标准 食品中伏马菌素的测定 （将于2024年3月实施）

LS/T 6130-2017 粮油检验 粮食中伏马毒素B1、B2的测定 超高效液相色谱法

本方案采用IAC-107伏马毒素免疫亲和柱

IAC-107伏马毒素免疫亲和柱能够特异性的纯化与浓缩样品中的伏马毒素B1 、B2 、B3 . 伏马毒素免疫亲和柱广泛地应用于粮食、食品、饲料、等样品的提取，该方法速度快、操作简单、准确性高，对准确灵敏的测定样品中的伏马毒素起到十分重要的作用。

✦ 操作流程✦

一、样品前处理

1.样品提取及稀释

1.2 移取2.0mI滤液加入48mL0.1%的吐温/PBS稀释混匀。

2.1将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下准确移取50.0mL上述样品溶液注入玻璃注射器中。

2.2将空气压力泵与玻璃注射器连接,调节压力使溶液以约1滴/s的流速缓慢通过免疫亲和柱,直至空气进入亲和柱中。

2.3用10mL水淋洗亲和柱流速为1滴/s~2滴/s.直至空气进入亲和柱中,弃去全部流出液，抽干小柱。

2.4准确加入3mL甲醇-乙酸溶液( 98+2 洗脱流速约为1滴/s,收集洗脱液。50°C下氮气浓缩吹干后，用乙腈水 (5+5) 定容至1 mL，待检测。

二、液相条件及衍生方法

柱前衍生法

色谱柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流动相: 甲醇:0.1MNaH2PO4(77: 23 体积比)用磷酸将PH值调到3.3

检测器: 激发波长335nm 发射波长440nm

进样体积: 20uL

衍生方法：取100uL标准溶液或样品净化液于进样瓶中加入100uL OPA衍生试剂A涡旋混合30s，在 2分钟内进样分析。

柱后衍生法

色谱柱: Cloversil-C18 4.6*150mm (5um) 或4.6*250mm (5um)

流动相: 甲醇/(65+35)

检测器:激发波长335nm发射波长440mm

进样体积: 20uL

衍生泵流速: 0.4mL/min

衍生温度: 50℃

衍生泵流动相: OPA行生试剂B

HP-L10柱后衍生系统  

HP-L20柱后衍生系统

✦ 实验结果✦

1、柱效回收：

2、样品添加回收：取玉米样品，伏马B1B2B3混标添加各1000ppb。

3、标准品及样品图谱

图1  柱前衍生标准品液相色谱图（出峰顺序B1，B3，B2）

图2  柱后衍生标准品液相色谱图（出峰顺序B1，B3，B2）

      图4  玉米加标液相色谱图