【点播课程】如何利用荧光寿命多标技术结合光谱分辨检测技术对更多亚细胞目标进行成像

我们通过荧光寿命成像显微镜（FLIM）鉴定了18种细胞渗透性合成探针，发现其中有8对组合适合荧光寿命多标。当在不同光谱通道中组合多对探针时，我们可以直接对多达四个亚细胞目标进行光谱解析荧光寿命多标。然而，合成探针只能用于少数目标，而且有时会显示出不合适的寿命特性。

因此，我们在使用合成有机探针的基础上，对合成荧光团采用了第二种标记策略，即自标记蛋白标签。可基因编码的自标记蛋白标签可与感兴趣的蛋白质融合，因此几乎可以标记任何需要的亚细胞靶标。我们设计了自标记蛋白标签 HaloTag7 的变体（即 HaloTag9、HaloTag10 和 HaloTag11），使结合的荧光团显示出不同的荧光寿命。

结合自标记蛋白标签和合成探针，我们可以在四个光谱通道中对多达八个目标进行成像。我们希望这两种方法能促进荧光寿命多标技术在活细胞中的应用。

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