新品！一款基于吐温20的病毒载体生产裂解液，更好满足法规监管要求

2023-09-19 14:13:15, 赛默飞生命科学赛默飞世尔科技生命科学产品

今年7月25日，国家药品监督管理局药品评审中心发布了关于《腺相关病毒载体类体内基因治疗产品临床试验申请药学研究与评价技术指导原则（征求意见稿）》征求意见的通知。其中有关“其他生产物料”的部分，特别强调了“尽量减少或避免 Triton X-100 等对环境或人体存在不利影响的试剂”。Triton X-100常作为化学去污剂被用于AAV病毒载体生产过程，用于细胞裂解和澄清。

近期赛默飞正式推出了Gibco CTS AAV-MAX Lysis buffer，作为Gibco CTS AAV-MAX Helper-Free病毒载体生产系统的组分之一，该裂解液是：

一款基于吐温20（又称聚山梨酯-20）的细胞裂解液。
不含蛋白成分，无动物源成分，化学成分确定，可直接用于细胞裂解。
经优化的配方可以更好的降低澄清后样品的浊度和沉淀物生成，包括在澄清和后续下游工作流程步骤之间存储样品时。

从研究到商业化的AAV载体生产系统

要想满足商业化需求，经济高效的可扩展的腺相关病毒（AAV）载体生产必不可少，平稳扩大至临床生产规模也十分必要。赛默飞开发的Gibco™ AAV-MAX Helper-Free AAV生产系统能够有效降低生产成本，并简化从研究（RUO版本）过渡到临床规模（CTS版本）的过程。

高滴度-> 5 x 10¹⁰ vg/mL (未纯化)
经市场验证的HEK 293F高产细胞株，GMP级别有完整的溯源文件
从摇瓶到1000L生物反应器的不同规模
研究级和GMP (CTS版本)，支持商业化用途

图1. AAV-MAX Helper-Free生产系统所包含组分。

经优化的完整系统，更高病毒滴度生产

AAV-MAX 系统的各个组分经协同优化，可获得更高病毒滴度，且无需对试剂和方案进行优化。完整的AAV-MAX系统，无论是效率还是病毒生产滴度都要高于替换单个组分后的系统或使用常规的聚乙烯亚胺（PEI）转染试剂的系统（图2）。

图2. 完整的系统可实现最大性能。使用AAV-MAX系统在125 mL摇瓶中以30 mL规模生产AAV2和AAV6。评估整套AAV-MAX系统的性能，并与其他转染试剂进行比较。通过qPCR测量滴度，数据被归一化为整套AAV-MAX系统的滴度。

在多种血清型中具有高滴度

创新的AAV-MAX Helper-Free生产系统是一套完整且经过优化的悬浮系统，可在多种AAV血清型中无缝且有效地生产高滴度AAV载体（图3）。

图3. AAV-MAX系统能够在多种AAV血清型中产生高滴度病毒。本系统用于在125 mL摇瓶中以30 mL规模生产6种AAV血清型。通过qPCR测量滴度。

加速临床应用过渡过程

AAV-MAX Helper-Free生产系统提供了从发现到研究和商业开发制造的平稳过渡，提供了一个经过优化的、可扩展的平台，具有研究级和GMP级别选项。图4显示了CTS和RUO系统与两种血清型的等效性，这将使您的研究顺利过渡到cGMP级商业化生产。

图4. 研究级（RUO）和CTS试剂之间AAV滴度的比较。在125 mL摇瓶中以30 mL生产规模生产AAV血清型AAV2和AAV6。通过qPCR病毒滴度测量，RUO和CTS AAV-MAX系统试剂的性能被证明具有等效性。

可扩大规模，满足商业化生产需求

现有AAV生产系统面临的挑战包括：较低的滴度，符合cGMP生产标准的质粒DNA成本较高，可扩展性差，缺乏符合cGMP生产标准的试剂。AAV-MAX系统是一套可扩展的悬浮培养平台，能够在大规模培养时仍然保持高病毒滴度（图5和6），该平台的试剂经过了预优化且符合法规要求，专为高AAV滴度生产而开发，让您无惧上述挑战。