应用分享 | MaxPeak Premier 色谱柱分析寡核苷酸药物

对于21-nt的寡聚物，分子中很大⼀部分（19个核苷）包含经修饰的核碱基，使用Premier OST BEH C18 (1.7 μm 2.1*100 mm)进行分析，无需钝化色谱柱就可以分析出14种杂质，连续进样结果稳定，LC-MS分析为经过修饰的寡核苷酸及其杂质的完整质量数确认，并提供了良好的质量精度（优于15 ppm），LC-UV分析可测量低⾄0.2%相对丰度水平的所有样品组分，详细内容可参考720007301ZH。

 图1. 21-nt样品中寡核苷酸杂质分离结果的TUV⾊谱图。

表1. 在经过大量修饰的21 mer 寡核苷酸中鉴定出的14种寡核苷酸杂质。

siRNA分子较短（约20~25个碱基对），经化学修饰的RNA双链体能够在体内调节蛋白质表达。siRNA可在变性条件下将双链体转化为两个互补的寡核苷酸分析，也可以在非变性条件下以完整双链体形式分析。图2为两种siRNA在非变性条件下的分析，详细内容可参考720007361ZH。

图2. 单链和双链体siRNA成分的IP-RP LC保留研究。

基因编辑在临床前和临床试验中取得了显著成功，基因编辑需要sgRNA将基因编辑酶引导到准确的位置，单个sgRNA长度通常在100 mer，并且也可被修饰。使用Premier OST BEH C18 300Å (1.7μm 2.1*100mm)色谱柱分离出sgRNA并对其序列确认，详细内容可参考720007897en。

图3. 离子对反相色谱法分析10 pmol 质量的完整sgRNA。