2023-05-31 10:57:23 Merck工艺解决方案
作者:陈智闻 金林峰 何庆龄
在生物制药开发过程中,构建稳定的高产细胞株尤为重要,它将伴随药品的整个生命周期,并直接决定了药品的开发成本、生产效率与产品质量。细胞株开发(Cell line development,CLD)作为生物药开发的起点与基础,大致可以分为以下几个步骤,包括:宿主细胞系的选择,表达载体的构建,细胞转染,细胞筛选与评估等等,从而获得生长能力强、放大性好、稳定且高产的优质的单克隆细胞株,由此看出细胞株开发的重要性,因此通过诸多策略优化CLD是很多公司的重点工作。通过优化细胞株的筛选方法进行CLD的工艺优化,高效的筛选方法可以直接决定优质单克隆的形成与否。
CHOZN细胞株-您的优质选择
默克提供CHOZN® GS-/-细胞株,一种GS(谷氨酰胺合成酶)敲除的宿主细胞株。其拥有的GS筛选系统区别于传统的DHFR/MTX筛选系统,稳定性更高,无需多轮扩增,大大缩短开发周期并降低了资源成本。除此之外,CHOZN® GS-/-细胞株拥有优质的细胞性能,可靠的产量和质量,放大性良好等优势。
向下滑动查看更多
那么,在获得一个优质的宿主细胞后,细胞筛选中的Minipool筛选对于整个细胞株开发流程也至关重要。Minipool筛选的目的是创建稳定表达的细胞池。由于每个池都会从小的初代细胞群开始,池与池之间自然会存在许多差异。通过筛选一系列不同的细胞池,从中选出较优的候选池,后续分离出高产量、稳定的单克隆概率就更高。
点击查看答案
接下来我们将着重讨论Minipool铺板的密度对细胞筛选的影响。Minipool筛选时的细胞铺板密度会影响细胞的生长状态、代谢情况、恢复率,进而改变细胞的稳定性、蛋白表达量和质量。例如铺板密度过低会使细胞生长缓慢,并且大大降低恢复率,从而需要提高筛选通量,导致了实验人员工作量的增加,延长了筛选周期。但铺板密度过高可能会导致同一个细胞池中细胞的竞争和相互作用,破坏细胞的生长状态,以至于影响后续单克隆的质量。因此在Minipool筛选时,优化细胞铺板密度是必要的。通常来说,铺板密度的优化需要考虑到细胞株类型、细胞培养条件与生产工艺等多重因素。一个合适的铺板密度会提高单克隆的质量与稳定性,为生物药的开发提供保障。
本次实验使用电穿孔的方式对宿主细胞CHOZN® GS-/-进行转染,并在转染24小时后进行minipool铺板,使用EX-CELL® CD CHO Fusion培养基,EX-CELL® CHO Cloning培养基。选取的96孔板铺板密度分别为:7500细胞/孔(200μL/孔)、5000细胞/孔(200μL/孔)、2500细胞/孔(200μL/孔)、1000细胞/孔(200μL/孔)。实验结果显示,使用7500细胞/孔的密度铺板,细胞拥有最好的恢复率为94.4%。在密度1000细胞/孔到7500细胞/孔的范围内,细胞恢复率随着铺板密度的降低而下降。
表1.细胞恢复率
对于细胞表达情况来说,在96孔板中,7500细胞/孔与5000细胞/孔都拥有良好的表现,7500细胞/孔的平均表达量略高于5000细胞/孔,表达量超过30mg/L的数量7500细胞/孔略高于5000细胞/孔。5000细胞/孔的铺板密度最高表达量高于7500细胞/孔,达到了76.5mg/L。
图1. 细胞表达情况
因此,我们选择铺板密度5000细胞/孔,细胞表达量排名前24的Minipool进行扩培,使用EX-CELL® Advanced™ CHO基础培养基和EX-CELL® Advanced™ CHO Feed1补料培养基,在摇管中进行Fed-batch,结果如下:
图2. 表达量Top24的Minipool
有83%的Minipool在D14的表达量超过1000mg/L,最高的Minipool表达量大于3000mg/L。统计数据表格如下:
表2. 表达量Top24的Minipool
综上所述,对于CHOZN®细胞株,Minipool可以选择相对较高的铺板密度(7500细胞/孔或5000细胞/孔)。考虑到恢复率和最高表达,推荐Minipool铺板密度为5000细胞/孔,可以使细胞株开发过程更高效并且节约一定的成本。
关于默克工艺解决方案
默克工艺解决方案,凭借可信赖的产品、丰富的生物制药工艺专业知识和卓越的法规支持,为生物制药客户提供全方位支持,以应对各种工艺挑战。
如需了解更多关于默克工艺解决方案,点击此处进入产品资料站。
05-08 圈内人都会关注
节庆喧嚣渐远,在皖仪“劳动与奉献”赞歌正亮!05-07 WAYEAL皖仪
这不是玄学,来试试不挑质谱的高深度血浆蛋白质组学!05-07 莲莲看
一文读懂|全球首款自复制RNA(saRNA)疫苗ARCT-154背后的专利05-07 耀海生物
【聚焦光谱】请看:一机多用,服务于两个不同光学实验!05-07 聚焦光电前沿领域
网络讲座复播视频:原子力显微镜缺陷检测的相关应用05-07 Park原子力显微镜
食品安全国家标准 | 食品中氯酸盐和高氯酸盐的的测定05-07 安捷伦科技
解构生物大分子 | 安捷伦与您相约全国生物医药色谱质谱及相关技术学术交流会05-07 安捷伦科技
【液体吸光度测量】典型配置、硬件说明、软件操作05-07
【会议预告】杭州大微与您相约第五届乳制品检测与控制技术交流会05-06 DW
【获奖名单公布】高纯度细胞色素C纯化工艺方案05-06 分离纯化部
珂睿邀您共同关注食品安全国家新标准方法解读!速来预约→05-06
展会邀请|天瑞仪器邀您莅临2024 CPCA SHOW国际电子电路(上海)展览会05-06
新芝生物2024渠道商交流会首站(杭州)圆满成功05-06 SCIENTZ
报名开始丨 EDS&EBSD高级应用培训班(北京站)05-06
QbD理念在工艺和杂质控制策略制定中的应用05-06 ACD/Labs
【百特小课堂】什么叫标准物质的不确定度05-06
中国第一,全球第五!丹东百特上榜“世界工业新闻”年度报告05-06
全国最大的电池展在重庆开幕,丹东百特豪华阵容参展05-06 丹东百特
BT-1001智能粉体特性测试仪05-06