TCR-T：实体瘤“攻坚手”的研发挑战与应对策略之细胞分选及亲和力调整

对于T细胞的筛选，利用HLA-I多聚体法，可通过多聚体染色和流式细胞术分选直接分离抗原特异性CD8+T细胞。丹纳赫生命科学旗下贝克曼库尔特中国智造的分选型流式细胞仪CytoFLEX SRT采用15 psi 超低压分选，在能够确保稳定分选的同时提高细胞活性与更好的功能性，为后续的T细胞改造夯实基础。

筛选最佳亲和力阈值的TCR也是一个难点，一方面需要尽可能筛选出那些对抗原具有高亲和力的TCR以增强免疫反应，但也需要控制其亲和力，超生理的TCR亲和力会损伤T细胞。

目前噬菌体展示技术已经在筛选高亲和力TCR方面显现出巨大的应用潜能。香雪精准在全球范围内率先将噬菌体展示技术应用于T细胞受体研究，发明了TCR的定向进化技术，并开发出了全球第一个人源高亲和可溶性TCR，使TCR识别pHLA的亲和性提高了100万倍以上。另外，Immunocore使用ImmTACs技术，获得高亲和力TCR。ImmTACs使用了工程改造的TCR为基础的靶向系统。TCR识别细胞内抗原，处理并递呈到细胞表面，形成peptide-HLA复合物（pHLA）。通过噬菌体展示技术可以显著提高TCR的亲和力，比抗原抗体结合的亲和还要高9倍左右。

丹纳赫生命科学拥有贝克曼库尔特Biomek i系列自动化工作站和美谷分子QPix高通量微生物克隆筛选系统，可以帮助进行繁琐的克隆筛选，提高工作效率。另外美谷分子的多功能酶标仪和贝克曼库尔特的CytoFLEX系列流式细胞仪可以进行大量的亲和力淘筛和验证的工作。

美谷分子的QPix系列高通量微生物克隆筛选系统可进行自动加样、涂布、挑取、复制、点样、文库重排，且具有高达3000个克隆/小时的挑取速度，能够大大减轻人力负担。

在TCR-T细胞治疗中，输注T细胞的类型和分化水平直接影响效应细胞的功能与作用时间，在很大程度上决定了TCR-T细胞治疗的效果。贝克曼库尔特的CytoFLEX流式细胞仪不仅能够进行淋巴细胞亚群和单细胞亚群的分析，还能分析T细胞的成熟阶段，包括初始、记忆、效应和终末分化阶段，精确把握不同阶段T细胞对治疗效果的影响。

当工程化TCR-T细胞改造完成后，其细胞活性、肿瘤杀伤活性的体外评价，需要合适的手段进行评估。美谷分子的SpectraMax 系列酶标仪能够用于生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

除此之外，TCR必须与患者的人类白细胞抗原(HLA)等位基因匹配才能识别pMHC并杀伤癌细胞。CytoFLEX 流式细胞仪能够监测T或B细胞是否受到受体血清中免疫球蛋白攻击，快速完成TCR和HLA之间的配型，保证安全性的同时缩短研发周期。