2023-05-25 14:21:43 伯乐生命医学产品(上海)有限公司(bio-rad)
客户
听说 Bio-Rad 的 ZE5 能做外泌体检测?我最近需要做这个实验。
是的,可以的!
伯乐技术专家
客户
那跟我讲讲外泌体的背景和 ZE5 的特点吧。
好的,安排上。
伯乐技术专家
背景一: 外泌体到底是什么呢?
细胞外囊泡是细胞分泌到细胞外的质膜包裹的囊泡。几乎所有的细胞类型都会分泌细胞外囊泡(Extracellular Vesicles),且细胞外囊泡上携带蛋白质,脂质以及核酸等丰富的信息。其有三种类型:外泌体(30-150 nm),微囊泡(50-1000 nm),以及凋亡小体(50-2000 nm)(文献1)。其中,外泌体的粒径最小,同时也是研究最为广泛的细胞外囊泡的类型。
图1:细胞分泌的三种细胞外囊泡
背景二: 外泌体的特征及功能?
外泌体是细胞状态的一个缩影,携带所分泌细胞中的丰富信息。其主要承载细胞与细胞之间的信息交流作用,并参与多种生理功能,例如血管生物学、免疫系统、胚胎发育、组织修复等。外泌体有其特有的标志物,其表面会表达 CD9,CD63 以及 CD81 等表面标志物,在外泌体内会表达 TSG101 及 ALIX 等蛋白(文献2)。外泌体表达的标志物使其可以被一些免疫学手段所分离和鉴定。
图2:外泌体的标志物
背景三: 外泌体的临床研究意义
自2013年外泌体的研究获得诺贝尔生理学或医学奖后,近十年来外泌体的相关研究十分火热。由于外泌体参与多种生理功能,其具有较好的临床应用前景。目前外泌体在临床上的研究主要集中在疾病诊断和疾病治疗两方面。
在疾病诊断方面,可通过检测人体内的血液或体液,来检测一些癌症的指标,此方法可取代一些肿瘤组织的活检,使得癌症的检测更加简便。在疾病治疗方面,未经改造的外泌体和经过改造的外泌体都具有治疗意义。肿瘤细胞内分泌的未经改造的外泌体可引起机体的免疫反应,具有一定的治疗意义。而经过表面改造的外泌体,例如在外泌体表面表达配体分子或者结合抗体,可以具有更好的靶向效果。而在外泌体内装载蛋白、核酸或者小分子,则可达到治疗疾病的效果(文献3)。
背景四: 使用流式检测外泌体的特点
目前检测外泌体的方法有很多,如电子显微镜、纳米粒子跟踪分析技术、蛋白质免疫印迹法等方法,流式细胞术因为具有不破坏外泌体形态,并且能特异性地检测外泌体标志物的表达等特点,已经成为越来越多外泌体研究中必不可少的一种研究工具。但大多数传统的流式细胞仪只能检测 500 nm 以上粒径的颗粒,无法检测粒径低至 50-150 nm 的外泌体。
ZE5为何能检测外泌体?
ZE5 仪器有诸多为支持小颗粒检测功能的独特设计,目前已有多篇使用 ZE5 研究外泌体的文献发表
1. 专属小颗粒检测器,无需手动切换任何硬件
ZE5 使用 100 mw 405 nm 激光的专属小颗粒检测器(SPD)来进行外泌体检测。使用 405 nm 的激光,相比于 488nm 的激光,可以更灵敏地检测到更小粒径的颗粒。在仪器操作方面,只需在软件上点击选择小颗粒检测器便可进行实验,无需切换任何硬件,并且小颗粒检测的通道不占用任何荧光检测通道。
图3:A,B.使用405nm下的小颗粒检测器检测不同尺寸的beads比488nm FSC的区分度更高;C. 小颗粒检测器 SPD 结合荧光通道可以区分和检测 20nm 尺寸的 beads
2. 双参数阈值设置,与背景噪音“划清界限”
ZE5 设计了两个参数来设置阈值,这区别于绝大多数仅用一个参数设置阈值的流式仪器。在 ZE5 上,可选择 FSC,SSC 或者荧光通道中的任意两个参数来设置阈值,例如可以设置 FSC 和 SSC,也可以设置 FSC 和任何一个荧光通道,例如图4中使用了 FSC 405/10(SPD)和 CD63-FITC 两个参数,将目标信号和背景噪音区分开来。灵活使用两个参数,来设置合适的阈值限,可以更好将外泌体从背景噪音中区分出来,尽可能减少图中显示的背景噪音,拥有更优质的数据结果。
图4:使用 FSC 405/10(SPD)和 CD63-FITC 两个参数来设置阈值
3. 双滤器设置,减少鞘液噪音
ZE5 的鞘液瓶内装有 0.22μm 的金属滤器,此外在仪器的内部还设计了一个 0.22μm 的鞘液滤器,该内部鞘液滤器也支持更换为 0.1μm 的滤器,可降低鞘液噪音对外泌体检测的影响。此外,Bio-Rad 也可提供用于外泌体检测的商品化鞘液 ProFlowTM Sort Grade Water (1451083),该鞘液经 0.1μm 的滤膜过滤两次,可以极大程度降低鞘液的背景噪音。
图5 :A. 鞘液瓶中0.22μm滤器的位置;B. 内置过滤器;C. Bio-Rad ProFlowTM Sort Grade Water
客户
我对背景和仪器清楚一些了,能否申请详细资料,或者试用呢?
没问题,请点击下面这个表格申请资料和试用。
伯乐技术专家
文献1:Biological properties of extracellular vesicles and their physiological functions. Journal of extracellular vesicles. 2015
文献2:The biology, function, and biomedical applications of exosomes. Science. 2020.
文献3:Exosomes and ultrasound: The future of theranostic applications. Materials Today Bio. 2023.
* BIO-RAD是BIO-RAD LABORATORIES, INC. 在特定区域的商标。
* 本产品仅用于科研用途,不用于临床诊断。
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