干货来了！肺组织单细胞悬液制备

肺是重要的呼吸器官，位于胸腔内，其纵隔的两侧分为左肺和右肺，表面覆盖脏胸膜，正常呈浅红色，质柔软呈海绵状，富有弹性。右肺有上、中、下三叶，左肺有上、下两叶。肺是以支气管反复分支形成的支气管树为基础构成的，其组织可分为实质和间质两部分，实质即肺内支气管的各级分支及其终末的大量肺泡，间质包括肺内结缔组织及血管、淋巴管和神经。从叶支气管至终末细支气管分为肺内的导气部，终末支气管以下的分支为肺的呼吸部，包括呼吸性细支气管、肺泡管、肺泡囊和肺泡。

临床上的肺部疾病表现多种多样，肺脏样本也是我们在单细胞测序样本制备中经常会收到的样本。下面就请跟小编一起，了解吉凯的专业团队是如何来针对肺组织样本进行特定解离和消化的吧！

将小鼠肺组织样本分离成单细胞。

2mg/ml  胶原酶I

2mg/ml  胶原酶II

0.04mg/ml  DNase I

60U/ML  透明质酸

400ug/ml  Liberase

100ug/mL  Eletase

HBSS

含0.5% BSA的 PBS

（1）实验准备

样本接收，拍照留存，超净台紫外消毒、备好冰盒冰板，配制含0.5%BSA的 PBS清洗液。

（2）单细胞悬液制备

1）按上述配方配制酶消化液，过滤；

2）将样本组织倒入培养皿中，放置在冰板上，记录编号，拍照留存，加入清洗液，用清洗液清洗两次；

3）弃去清洗液后，向皿中加入少量消化液，用剪刀将样本组织剪碎；

4）将剪碎后的组织转入到离心管中，加入适量消化液；   

5）取20µL消化悬液进行台盼蓝染色镜检；

6）用封口膜将离心管封好，将样本放置在37ºC摇床消化1h；

7）用移液器吹打消化液，辅助消化；

8）消化结束后将悬液通过100µm,40µm滤网转移至离心管内，300×g离心5min；

9）弃去上层液体，加入红细胞裂解液轻柔吹散细胞，静置3min；

10）加入清洗液至终止裂红，300×g离心5min；

11）弃去上清，加入适量清洗液重悬混匀，分别取20µL进行AO/PI计数及台盼蓝镜检；

12）根据质检结果选择合适方案，去除杂质及死细胞；

13）加入清洗液清洗，300×g离心5min；

14）弃去上清，加入适量清洗液重悬混匀，分别取20ul进行AO/PI计数及台盼蓝镜检；

15）反馈质检结果，等待上机。

小鼠肺脏样本

细胞活率：95.46%

活细胞浓度：7.83E+05/ml

人肺纤维化样本

细胞活率：95.06%

活细胞浓度：9.09E+05/ml