解决方案 | 禾信仪器三重四极杆液质联用系统助力动物性食品禁用药物残留鉴定

氯霉素是一种广谱抗生素, 能抑制细菌蛋白质的形成, 对骨髓造血机能有抑制作用, 从而引起人的粒细胞缺乏病、再生障碍性贫血和溶血性贫血等毒副作用, 氯霉素在动物组织中的残留不仅对动物和人体有直接危害, 更严重的是低浓度药物残留会诱发致病菌的耐药性, 对人类的健康构成巨大的潜在威胁。氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考属于酰氨醇类药物, 曾被广泛地用于动物各种传染性疾病的预防和治疗。甲砜霉素、氟苯尼考与氯霉素的结构相似, 是替代氯霉素的理想药物。2003年农业部193号公告《食品动物禁用的兽药及其他化合物清单及2020年农业部250号公告《动物性食品中兽药最高残留限量》附录4中规定氯霉素是在动物食品中禁止使用的药物, 在动物食品(全部可食用的动物组织以及蛋和奶)中不得检出氯霉素。欧盟和美国也规定氯霉素在动物中禁止使用。

1 试剂、材料

超纯水: 屈臣氏纯净水      

乙酸乙酯（C4H8O2）: 色谱级

正己烷（C6H14）: 色谱级

甲醇(CH3OH）: 色谱级

单一标准物质溶液（甲醇）：c(100.0 μg/mL)，氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和d5-氯霉素。

2 仪器和设备

液相色谱质谱联用仪：LC-TQ 5200（禾信）；注射泵；涡旋振荡仪；超声波清洗器；移液器；分析天平：d=0.1mg（sartorius）。

3 样品前处理

净化：玻璃试管中的残渣用2mL水溶解，超声5min，加入2mL正己烷涡旋混合30s，静置分层，弃掉上层的正己烷，再加2mL正己烷涡旋混合30s，静置分层，移取1mL水相于1.5mL的聚丙烯离心管中，以13000r／min离心5 min，过0.2μm滤膜后，供液相色谱质谱测定。

4 仪器条件

1 标准谱图和物质信息

图1.3种目标物和内标标准溶液总离子流图

3种目标物和内标总离子流图见图1。3种目标物和内标的MRM色谱图见图2。3种目标物和氘代内标的定性、定量离子对以及具体质谱参数见表3。

图 2 氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考

和 d5-氯霉素标准物质的 MRM 色谱图

2 标准曲线

平行取若干份2g可食动物肌肉，添加混合标准工作溶液和内标标准物质工作溶液，进行前处理后得到目标物浓度分别为0.05μg/kg、0.1μg/kg、0.5μg/kg、2μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、50μg/kg、100μg/kg，内标浓度均为20 μg/kg的添加样品提取液，并进行分析。3种目标物的线性相关系数R2结果见下表4，均大于0.990，满足标准的要求。

图3. 3种目标物标准曲线图：

（a）氯霉素，(b) 甲砜霉素，(c) 氟苯尼考

3.1 精密度

3.2 准确度

对2g可食动物肌肉样品加标（3种目标物浓度分别为0.5μg/kg、2μg/kg、10μg/kg）的回收率进行评估，结果详见下表6。加标浓度为0.5μg/kg、2μg/kg、10μg/kg动物肌肉基质的回收率分别为89.7%~114.4%、98.4%~102.2%、92.9%~101.1%，回收率结果满足实验室内分析检测要求。

3.3 检出限

比较了采用禾信LC-TQ 5200实测的方法检出限与标准方法检出限。从下表7可知，实测方法检出限范围0.02μg/kg ~0.03μg/kg，所有目标物检出限均低于GB/T 20756-2006标准要求。

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本文依据GB/T 20756-2006《可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》，采用禾信LC-TQ 5200分析了可食动物肌肉中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考。实验结果表明禾信LC-TQ 5200具有优异的重现性和检测灵敏度，完全满足动物性食品中禁用药物残留检测的需要。