5步理清流式细胞术

充分了解你感兴趣的细胞群的生物学，包括细胞频率、抗原表达和抗原定位。这不仅可以帮助实验设计，同时可以确保你正确阐述结果。

• 确认检测细胞群体的频率，确保你在样本采集的时候记录足够的细胞数。

• 确认检测细胞指标的表达水平，确认你的检查方法能够识别稀有或低表达标记。

• 明确细胞各个指标的定位，从而确保你的试验方案可以检测细胞表面、胞内或核内指标。

确认选择的抗体可以被运用到流式细胞仪，确保抗体偶联的荧光染料与所拥有的流式细胞仪的激光、滤光片和检测器相兼容。

• 如果你正在构建一个多色方案，为了尽量减少光谱重叠，选择跨激光和滤光片染料。

• 为了最佳检测效果，亮染料应预留给稀有指标，亮度低的染料分配给表达丰富的指标。

合适的实验对照可以确保实验结果的真实性，可以减少可能的繁重的故障排除，确保实验数据的有效性。在流式实验中需要考虑的对照有阴性和阳性对照、荧光减一对照、活性对照和同型对照。

• 活性对照可以用于确认细胞健康。死细胞和垂死细胞有较强的自发荧光，同时会非特异性结合荧光抗体，因此你需要从分析中排除这类细胞，确保流式结果的有效性。  

• 在多色实验所选的荧光染料的谱图重叠不可避免，荧光减一对照可以帮助你确认合适的圈门策略。

• 同型对照可以帮助确认染色中是否存在非特异性结合。

• 检测胞内抗原需要选择合适的破膜剂。

• 为你的实验选择合适的缓冲液，个别高亮染料需要配套染色缓冲液。

• 在上机检测前过滤你的样本，从而避免结块和细胞聚合。

• 请记住并非所有抗体会识别先前固定的表位。

在进行任何实验开始之前，确认是否选择了合适的激光和滤光片用于荧光染料的检测。

• 确保仪器的电压已经进行了合适的调整，在轴上可以看到阴性群体和阳性群体。在不同的样本之间保持相同的电压进行分析。

• 实验之前确保仪器可以顺利进行并且确保质控顺利通过。

• 花时间设置合适的圈门策略，允许你将目标群体和其他群体区分，此外在不同样本之间保持圈门策略的一致。