产品速递丨Raptor EtG/EtS 柱

2022-10-19 16:40:51, 技术专家 瑞思泰康科技(北京)有限公司上海分公司


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Rxi-SVOCms 网络研讨会 活动预告

Restek 特别邀请美国资深气相色谱专家 Jaap de Zeeuw ,为大家深度讲解这款专为半挥发物分析而设计的 Rxi-SVOCms 气相色谱柱


会议主讲人:美国资深气相色谱专家 Jaap de Zeeuw

会议时间:2022年10月21日 13:00-14:00

参会方式:  ☞ 点击此处 预约观看   


☞点击下图

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Raptor EtG/EtS 柱,快速、准确地分析酒精代谢物EtG和EtS

硫酸乙酯(EtS)和葡萄糖醛酸乙酯(EtG)是乙醇的非氧化代谢物,由乙醇经II相代谢产生,是判断乙醇摄入的生物标志物。由于较高的特异性和较长的检测时限,通常,即使是在乙醇完全代谢的情况下,尿液中的EtS和EtG也可以在戒酒治疗和性侵案件中用来判断近期的饮酒行为;同时,尸体中的EtS和EtG也可用于区分尸体中所检测到的乙醇是来源于生前饮酒还是死后腐败产生。

葡萄糖醛酸乙酯(EtG)和硫酸乙酯(EtS)是监测酒精使用的重要生物标记物。尿液中EtG和EtS的分析为戒酒治疗监测提供了许多优势,包括三天的检测窗口、妥善保存样本的良好稳定性和分析特异性。然而,EtG和EtS都是极性化合物,很难通过反相色谱法保留(图1)。这两种化合物对基体干扰也非常敏感,因此,如果保留不足以从样品基质中分离EtG和EtS,则很难获得准确的结果。使这一分析更加复杂的是,人与人之间以及族群与族群之间的尿液本质上是可变的,更不用说不同的健康状况,以及无数其他变异来源。如果发生基质抑制,可能不符合检测下限。更重要的是,如果共洗脱基质组分与目标化合物等重,则可能无法精确定量。

分析尿液中的EtG和EtS的主要问题之一是从干扰基质成分中分离目标化合物,这特别困难,因为在通常使用的反相柱和条件下保留不足。共洗脱基质组分会影响相关分析物的电离,即使基质组分未在MRM通道中监测。而且,对于这种应用,在受监控的MRM通道中通常会出现基质成分,共洗脱成为识别和定量的一个相当大的问题。
Restek开发了一种新的Raptor EtG/EtS色谱柱,该色谱柱能够从基体干扰中始终如一地保留并分离EtG和EtS,从而提供准确、可靠的结果。可靠的性能和较长的色谱柱寿命使该色谱柱成为高通量实验室监测酒精消耗的理想选择。
分析人体尿液中EtG和EtS的典型方法有几个局限性:基质成分中EtG和EtS的保留和分辨率差,限制样品处理量的长运行时间,柱寿命短。Restek的化学家开发了一种简单的稀释进样LC-MS/MS方法,使用Raptor EtG/EtS柱进行EtG/EtS分析,在四分钟的快速分析时间内提供了一致的分离。
Raptor EtG/EtS柱具有专为该关键应用开发的新型固定相。该方法是在Raptor EtG/EtS柱上开发和严格测试的,它提供了持续洗脱目标分析物所需的保留,远离基质干扰,并且坚固耐用,能够满足高通量实验室的要求。与所有新的色谱柱一样,为了确保良好的响应、峰型和一致的保留时间,最好进行多次平衡进样。作为方法开发的一部分,我们推荐在新的色谱柱上通过全梯度程序进行30次基质进样,确保了后续样品分析过程中的性能高度一致(图1)。
通过正确平衡新的色谱柱,并采用Restek的EtG/EtS方法进行样品制备和分析,高通量实验室测试人体尿液样本中的这些酒精消耗生物标记物时,可以确保准确、一致的结果。

图1: 柱正确平衡后,使用下述方法参数获得高度一致的EtG/EtS结果。即使在进样1000次后,基质干扰仍能很好地分离。

LC_CF0706

色谱峰

前体离子

产物离子

产物离子

1.

乙基-β-D-葡萄糖醛酸苷-d5

225.9

84.9

-

2.

乙基-β-D-葡萄糖醛酸苷

220.8

84.9

74.8

3.

硫酸乙酯-d5

129.7

97.7

-

4.

硫酸乙酯

124.7

96.8

79.7


色谱柱

Raptor EtG/EtS (货号9325A12)

尺寸:

100 mm x 2.1 mm ID

粒径:

2.7 µm

孔径:

90 Å



保护柱:

UltraShield UHPLC 柱前过滤器, 0.2 µm frit (货号25809)

Temp.:

35 °C

标品/样品


稀释剂:

0.1% 甲酸水溶液

浓度:

在尿液中制备500 ng/mL QC样品。用950µL工作内标物(25 ng/mL EtS-d5100 ng/mL EtG-d50.1%甲酸水溶液)稀释50µL样品。样品以3500 rpm的涡旋10秒进行混合。然后在10°C下以3000 rpm离心样品5分钟。取上清液中,自动进样。

进样量:

10 µL

流动相


A:

0.1% 甲酸水溶液

B:

乙腈+0.1% 甲酸


时间(min)

流速(mL/min)

%A

%B

0.00

0.5

95

5

2.50

0.5

65

35

2.51

0.5

95

5

4.00

0.5

95

5


检测器

MS/MS

电离模式:

ESI-

模式:

MRM

仪器

HPLC

备注

参考标准品
 
乙基-β-D-葡萄糖醛酸苷(货号34101)
 
乙基-β-D-葡萄糖醛酸苷-d5 (货号34102)
 
硫酸乙酯钠盐(货号34103)
 
硫酸乙酯-d5钠盐(货号34104)


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