2022-10-14 12:40:52 东曹(上海)生物科技有限公司
在重组蛋白的纯度检验、生物药的多聚体分析中经常会使用到UHPLC-SEC方法。但在进行微量分析时候,SEC色谱柱中的蛋白质有时会因非特异性吸附而导致定量和重现性出现问题。另外,在使用光散射分析多聚体或质谱分析时,有时会因为柱流失产生的干扰物质而无法进行精确检测。东曹新一代UHPLC-SEC色谱柱TSKgel UP-SW3000-LS可以解决此类分析难题。
蛋白质非特异性吸附的对比
将微量的标准蛋白质混合溶液 (全部2.5 mg/次) 连续10次进样至UP-SW3000-LS色谱柱中,将第10次的洗脱峰面积作为100时的第1次的洗脱峰面积,并计算出蛋白质的非特异性吸附率。结果表明,TSKgel UP-SW3000-LS的非特异性吸附率约为2.5%,是现有产品UP-SW3000色谱柱以及其他市售UHPLC-SEC色谱柱的一半以下。
图1. 不同色谱柱蛋白质非特异性吸附的对比
根据使用TSKgel UP-SW3000-LS时的蛋白质非特异性吸附率进行反向推算,使用该色谱柱只需2次进样(老化处理)即可准确分离微量蛋白样品并可获得良好的重现性。
光散射检测抗体药物异质性
使用SEC法分析抗体药物的分子大小变异体时,由于UV检测可获得的信息有限,所以一般推荐通过光散射检测器进行分析。然而,在LS检测时,会因色谱柱流失而检测到尖峰噪声和鬼峰,而导致检测精度降低。TSKgel UP-SW3000-LS在设计上可抑制这类尖峰噪声和鬼峰的出现,进而能够准确的进行LS检测。
图2. 与MALS检测器的联用分析
质谱分析时的柱流失情况对比
将质谱检测器连接到SEC分析系统对抗体分子大小变异体、糖链结构进行分析的应用越来越多。但同LS分析一样,MS分析也会因柱流失的影响导致分析困难。
使用TSKgel UP-SW3000-LS,在最初的色谱柱平衡过程中就能去除几乎所有脱落的干扰物质,在之后进样空白样品 (洗脱液) 时,柱流失也非常少,与市售其他品牌的UHPLC-SEC色谱柱相比,可获得重现性更好的基线。
图3. ESI-MS应用时两种UHPLC色谱柱柱流失比较
TSKgel UP-SW3000-LS产品信息
如需了解该色谱柱的更多信息,请
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