2022-10-08 14:16:18, 食品安全的守护者 山东美正生物科技有限公司
本应用采用美正MUTIPURE多功能净化仪结合高效液相色谱-紫外检测器(HPLC-UV)建立了婴幼儿配方奶粉中乳铁蛋白的检测方法。
样品经磷酸盐缓冲溶液提取,肝素亲和柱富集净化,C4色谱柱分离,外标法进行定量。
结果表明,添加量为400 mg/kg时,乳铁蛋白回收率在85% ~ 90%,能够满足检测要求。
实验部分
主要仪器设备
Aglient 1260高效液相色谱-紫外检测器。
MUTIPURE多功能净化仪。
试剂材料
0.1%三氟乙酸溶液:量取三氟乙酸1 mL,加水定容至1000 mL,混匀;
结合缓冲液:称取30.083 g十二水合磷酸氢二钠,2.496 g二水合磷酸二氢钠,加900mL水溶解,加入20mL乳铁蛋白提取试剂A(50倍浓缩液,肝素亲和柱包装盒中),最后用水定容至1000 mL混匀;
洗脱液:称取7.52 g磷酸氢二钠,0.624 g磷酸二氢钠,29.2 g氯化钠,加400 mL水溶解,定容至500 mL混匀;
乳铁蛋白标准储备液(10 mg/mL):准确称取按其纯度折算为100%质量的乳铁蛋白各0.1 g于10 mL容量瓶中,加水溶解后定容至刻度;
肝素亲和柱:3 mL(P/N:QC0140)。
样品制备
样品提取
精确称量2.5 g样品于离心管内,加入结合缓冲液30 mL,涡旋振荡至样本全部溶解,再加入结合缓冲液定容至50 mL,混匀,11000 r/min 4℃离心15 min,立即吸取25 mL中间层试液于另一50 mL离心管内,11000 r/min 4℃离心15 min,立即取出中间层至15 mL离心管,恢复至室温后待净化。
样品净化
将上述待净化液按顺序连接上样管,再取15 mL离心管依次置于收集架上,将肝素亲和柱连接在MUTIPURE多功能净化仪上(如下图),按照下表的指令设置方法,启动仪器,由仪器自动完成净化步骤。
肝素亲和柱连接在MUTIPURE多功能净化仪
MUTIPURE多功能净化仪仪器参数
后处理:涡旋混匀,离心5 min,取上清液上机待测。
色谱条件
色谱柱:DAISOPAK SP-300-5-C4-BI0,4.6 × 250 mm;
流动相A :0.1%三氟乙酸溶液;
流动相B : 乙腈;
柱 温:30℃;
波 长:280 nm;
进样量:30 µL;
流 速:1 mL/min;
梯度洗脱见下表。
液相色谱梯度洗脱条件
实验结果
乳铁蛋白加标回收实验结果(添加水平400 mg/kg,n=4)
实验谱图
40 µg/mL乳铁蛋白标准溶液色谱图
婴幼儿奶粉基质空白色谱图
400 mg/kg婴幼儿奶粉基质
加标色谱图
实验结论
本实验采用MUTIPURE多功能净化仪结合高效液相色谱-紫外检测器对于加标量为400 mg/kg的婴幼儿奶粉进行检测。
结果表明,使用MUTIPURE多功能净化仪对婴幼儿奶粉基质进行净化,乳铁蛋白回收率满足要求且RSD小于10%,说明MUTIPURE多功能净化仪适用于婴幼儿奶粉中乳铁蛋白的检测,且方法稳定。
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