AAV滴度检测，耶拿可以做什么（中篇）——基因组滴度检测的qPCR体系配置

       基因治疗领域目前最常用病毒载体之一是腺相关病毒（AAV），以AAV作为载体开发基因治疗药物时，必须对多种关键质量属性进行检测，其中放行的最关键指标之一就是AAV病毒滴度测定，准确定量AAV载体病毒滴度对于临床前和临床剂量标准至关重要。

      AAV病毒滴度通常分为物理滴度和感染滴度。

      物理滴度一般是指基因组滴度或者衣壳滴度。

      在测定AAV的含量时，通常采用基因组滴度或者衣壳滴度作为单位，其中基因组滴度为携带基因组的AAV的浓度，衣壳滴度为AAV物理颗粒的浓度。基因组滴度一般采用qPCR、ddPCR、染料法、UV/Vis等方法来测定；衣壳滴度主要是通过ELISA、HPLC等方法来测定。

       一方面滴度检测多为绝对定量的方法，为了获得较好的标准曲线（R2>99%，扩增效率在95~105%之间）每一板检测都需要准确稀释标准品或阳性对照；样品的几个技术性重复之间的标准差也有较高要求

       另一方面为了提升AAV病毒的滴度检测能力，很多基因与细胞治疗企业都采用384通量qPCR仪进行检测，384通量的qPCR试剂消耗更少但是体系配置更加困难。

       QPCR体系构建及检测：目前实验结果变异系数大的另一个挑战在后续定量PCR实验中，AAV感染性单位则采用荧光定量聚合酶链式反应（qPCR）测定判定是否为阳性孔，qPCR结果的稳定性和重复性也会对最终结果有影响，

       FeliX也可以自动进行PCR体系构建工作，包括标准品的稀释，qPCRmixture的配置并分配到整板，整板模板转移混合，以及整个配置好的反应体系向384孔板的分装等工作。

• 减少操作误差

• 尤其在样品量大的情况下，可以更好地提高工作效率

• 耶拿特殊的Tip-tray枪头加载技术，使得FeliX拥有良好的气密性，整板Tips处于同一水平面，能够确保移液的精确性和均一性

       另外，耶拿CyBio-SELMA便携式移液工作站可以替代CyBio-FeliX的一部分工作，完成整板模板转移混合，96转384的体系分装等工作。

• 作为半自动的移液工作站，也可轻松实现整板加样，而且其精确的定位功能搭配适配器可实现96孔板与384孔板间的转移；

• 高度记忆功能方便储存程序；

• 同样耶拿的Tip-tray技术，也使得SELMA拥有良好的气密性，整板Tips处于同一水平面，能够确保移液的精确性和均一性；

• 简洁的界面和众多的应用程序保证了仪器操作的便利性。

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