Flash纯化时，什么时候需要使用ELSD（蒸发光散射检测器）？

2022-07-31 21:02:50, Biotage 拜泰齐贸易（上海）有限公司

Flash快速色谱看似简单，但其实可能很复杂。溶剂选择、色谱柱大小、固定相、载样技术、梯度方法、流速和检测参数都是影响快速色谱和您成功使用该纯化技术的因素。在这些变量中，检测参数（即检测器类型）确确实实会很大程度地影响快速色谱的结果。

尽管绝大多数小分子化合物（至少是药物发现实验室制造的化合物）在一个或多个波长上具有紫外线吸收，但随着更多底物的拓展，越来越多的合成和天然化合物几乎没有紫外吸收。当这种情况发生时，大多数化学家会添加不同的检测器，如蒸发光散射检测器（ELSD），以发现和分离此类样品。

然而，根据我的经验，对于许多被认为需要ELSD的化合物，当将DAD二极管阵列UV检测器（全波段扫描）调整到目标产物的适当波长范围时，可以提供足够高的灵敏度，从而保证样品的完整检测；属于这一类别的化合物类型包括一些脂类和萜烯，以及其他具有低紫外线吸收灵敏度的类似化合物。

脂质体在最近几年一直在新闻中出现，其是基于mRNA的新冠肺炎疫苗使用几种不同的脂质体化合物而制成，并且是一组通常认为需要非紫外线检测器或ELSD才能有效纯化的化合物。事实上，ELSD检测可以提供预期的结果，但DAD全波长紫外线检测器也可以提供预期的结果，该检测器可以根据这些化合物的具体波长范围（198-810 nm）进行调整。

下面我们通过具体的实例来验证波长聚焦检测代替ELSD的合理性，此次我们使用反相快速色谱技术纯化饱和脂肪酸酯-月桂酸甲酯（C12:0）、不饱和脂肪酸酯-油酸甲酯（C18:1）以及胆固醇，以上几种样品都是紫外信号比较弱的样品，是一种用于mRNA疫苗的脂质纳米颗粒混合物的脂质。

胆固醇

油酸甲酯

月桂酸甲酯

为了将两种检测方式进行对比，我们此次将波长聚焦的检测技术与ELSD结合使用，该技术使用窄波长范围进行积分加成检测，并在实际上提高了以上这些化合物的紫外吸收强度，其信号强度甚至可以直接媲美ELSD，见图1。

图1 紫外波长聚焦检测（198-220 nm）和ELSD通过反相快速色谱纯化脂质体混合物。

尽管通过ELSD（绿色线）每种样品都可以有很好的吸收，但在Selekt紫外聚焦的条件下，月桂酸脂和油酸甲酯的酯基（黑色、红色和蓝色线）都可以被很强的检测到，并且不产生样品损失（和ELSD相比）。另外具有双键的化合物，如油酸甲酯和胆固醇，也会吸收紫外线并可检测，尽管波长很低，如图2所示。

图2:每种纯化脂质的紫外光谱。紫外线吸光度范围为200 nm至220 nm。

对于此类脂肪类化合物，它们的最佳吸收波长往往在200 nm–220 nm之间，另外这种较窄的紫外吸收范围确实也会影响溶剂的选择，往往此时我们需要选择在该波长范围内没有紫外吸光度的溶剂（乙腈、甲醇、丙酮、己烷、水）。因此此次我们使用水和甲醇进行上述色谱分析。

那么，什么时候需要ELSD检测器呢？往往是在纯化那些不含紫外吸收官能团（例如酯）的饱和脂类化合物、饱和萜烯和其他不含紫外吸收基团的分子。但凡您的样品当中一个或者多种脂基羰基这种具有紫外吸收的基团，您都无需额外配置ELSD检测检测，通过Biotage紫外聚焦检测功能即可完成弱紫外吸收样品的分析和检测。

更多关于Flash检测和收集技术问题，欢迎留言讨论！

Biotage 的近期文章