2022-07-20 15:28:55, Sarah 上海玮驰仪器有限公司
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PCR技术已应用到生物制药领域的各个环节从前期研发阶段后选序列的筛选,到工艺开发环节稳健方法的建立,至生产放行的把控。每一个环节都需要倚仗PCR技术的结果作为衡量的依据。诸如支原体,宿主DNA,内外源性病毒,逆转录病毒等风险因子都要求在生产起始、中间过程和终产品阶段,进行定性或定量PCR分析,以确保风险因子可控。对CART,TCRT,CAR-NK等细胞治疗产品而言,CAR/TCR基因拷贝数,RCR/RCL复制型慢病毒检测,转染效率等也都是必需的PCR检测项目。
PCR体系构建中经常遇到的问题
一个样品多项目检测,体系构建相当复杂(多引物、探针、酶、dNTP、模板和Mg2+,缓冲液)在过程中易出现加样错误;
操作繁琐但定量结果判定又很严:标曲R2大于0.98,扩增效率介于90-110,最低标准点Ct不高于39。一旦结果不达标,又消耗大量人力重新开展实验;
RCL检测出现假阳性,无模板的阴性对照(No Template Control,简称 NTC)NTC也由于污染造成假阳性;
每日样品及样品量不一样,需要跟进样品量调整孔板加样的位置;
由于没有数据追踪,结果失败却很难排查错误原因;
不同实验员不同时间重复性差。
如图所示,CART免疫产品质控中,定量PCR构建体系。(点击放大)
所以大家都在寻找一个极易上手、高效快速构建各类高精度反应体系,且能标准化的试验结果。珀金埃尔默(PerkinElmer)公司推出的新一代JANUS G3 自动化PCR体系构建工作站就是一个极佳的解决方案。可满足的应用包括DNA/RNA的提取、纯化;DNA/RNA 浓度均一化;PCR 和测序产物纯化;PCR 反应板的建立(PCR, RT-PCR, Real Time PCR)等相关实验。
JANUS G3自动化PCR体系构建工作站
(点击放大)
JANUS G3自动化PCR体系构建工作站以其稳固的性能,灵活的配置,简便人性化软件操作,正在逐步瓦解诸多手工操作遇到的难题。
JANUS G3 PCR体系工作站特质
一、消除实验误差,提高实验精度,重复性好
在PCR和qPCR加样过程中,尤其在配置96孔或者384孔反应板时,采用高通量高精度的自动化PCR构建体系,可以避免在高压工作下人工疲劳操作带来的不均一性,减小实验误差,并提高样本处理效率。
1. JANUS G3自动化PCR体系构建工作站具有AccuSense液面感应技术,每通道独立移液器均可以精确的进行液面探测,吸头总是接触液面下1-3mm,确保能吸到样品,同时尽量避免液体吸附到吸头外侧臂;确保最佳的移液精度,减少样品吸附残留。兼容大量的电离液和非电离液,包括有机溶液(如DMSO,甲醇)。减少交叉污染,确保数据完整性。
固定钢针或者吸头可探测或追踪液面位置
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如图一所示:微量体积移液时,在不同移液体积下,CV值的波动极小,重复性极佳。
图一:微量体积移液的重复性和稳定性
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如图二所示:大体积移液时,准确性均大于99%,CV波动性更小。自动化PCR体系构建工作站移液范围是0.5ul-5000ul。
图二:大体积移液的重复性和准确性
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2. 基于系统液的液相驱动移液技术,一方面确保无可匹敌的高精度移液,另一方面也避免了气溶胶的污染(因可用系统液对整个液体管道和一次性吸头适配器进行清洗)。在大部分的案例中,都能避免使用昂贵的带滤芯的吸头,而只用正常的标准吸头。
二、灵活性突出,适用于复杂多变的应用场景
1. 移液分液灵活选择
Varispan具有4通道或者8通道移液臂,可独立探测液面并在Z轴独立运动。各通道移液器之间的间距可自动调整,可操作试管、微孔板、深孔板和试剂瓶。同一移液臂,可进行灵活的多通道移液,提高了工作效率。以8通道移液臂为例,进行96 PCR板体系构建,只需不到10分钟,即可快速完成实验。相比手工操作,实验通量更高,也避免加样错误的发生。
2. 可整合和扩展性
移板机械臂可同时整合循环扩增仪。微孔板放入、移出循环仪、微孔板移动到振荡器、冷热温控、离心机等都可以实现自动化。
三、简便易用且功能强大的操作软件WinPREP
1. 预定义的实验器具,简化了实验程序的建立;具有用户使用向导,可指导用户收集相关实验器具和试剂及位置摆放,仪器维护等。减少客户对自动化的恐惧,实验过程能被快速启动和运行。节省更多的时间,确保实验顺利运行,获得更好地实验数据和稳定性,这对于新的用户尤其重要。
2. WinPREP 软件具备调用应用程序、追踪样品制备过程,以及整合辅助设备的能力,以实现全自动化应用解决方案,满足样品在处理过程中的可追溯,可记录。
3. 符合 21 CFR Part 11 相关法规规范,只有授权用户才可以访问设备,数据从生成的那一刻起自动保护,满足数据安全性和溯源性要求。
两个型号供您选择
JANUS G3 自动化PCR体系构建工作站实现灵活的无人看守的PCR反应建立, 减少技术人员的动手时间,减少人为错误,提高实验稳定性和重复性;同时也大大提高了工作通量和质量。相信在不久的将来,JANUS G3 自动化PCR体系构建工作站能够在越来越多的应用中释放能量,助力整个生物制药产业逐步迈向自动化的进程。
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