直播预告丨Lonza全球专家分享最新数据，用于美国药典(USP)纳入重组C因子(rFC) 内毒素检测法的评估

内毒素是革兰氏阴性菌的细胞外壁层上的特有结构，又名脂多糖（LPS）。LPS成分进入人体血液后，内毒素大量聚集于血液中，超过机体系统的清除能力，会导致内毒素毒性效应，即热原反应，包括发热、腹泻、呕吐，以及致命的内毒素休克。

由于内毒素是革兰氏阴性菌死亡或粘附与其他细菌时细胞壁破碎或溶解所产生的，其本身又具有耐热性和稳定性，通过高压蒸汽处理也不能完全使内毒素灭活，因此内毒素在各种溶液中及接触水溶液的器壁上都是存在的。

而在制药行业，特别是注射用药，对细菌内毒素进行可靠和有效的检测是重要环节。标记为无热原或无菌的注射或植入产品必须进行内毒素检测放行。许多原材料检查也必须进行内毒素检测方能用于GMP生产，以达到设计标准的质量要求。

重组C因子检测内毒素优越性和适应性

在医学上，鲎的珍贵蓝色血液价值极大鲎的血液含有一种特殊的免疫细胞——“阿米巴样细胞”。这种细胞对细菌非常敏感，遇到含有使人发热、休克甚至死亡的细菌类毒素会立即凝固或者变色，科学家们根据这种特性研究制造出了鲎试剂，使其成为了世界医疗卫生领域检测细菌内毒素的标准方法，并逐步被收载于药典。根据鲎血来源不同，一般分为LAL（美洲鲎试剂）/TAL（东方鲎鲎试剂）。

随着我们对鲎试剂的需求越来越多，而鲎试剂的生产原料鲎和鲎血却越来越少。与此同时鲎试剂还存在除了能与内毒素反应外，还会与(1-3)-β-D-葡聚糖反应，造成假阳性结果，存在非特异性干扰，以及批次稳定性问题。为了实现细菌内毒素检测的可持续发展，科学家进行了微量化以及替代方法的研究。

根据鲎试验反应原理，目前行业内已经建立了四种主要的细菌内毒素检测方法：凝胶法、浊度法、显色法和重组C因子（rFC法），并在非肠道药物和注射器械生产过程控制和产品放行质控检测中有着重要的应用。

浊度法、显色法和重组C因子法是定量方法，凝胶法为定性或者半定量方法。浊度法、显色法和凝胶法依赖于鲎血，随着基因工程技术的发展，出于对鲎资源的保护，重组C因子法更具有适用性。

C因子是鲎试剂中对细菌内毒素敏感的蛋白，能够选择性识别内毒素。重组C因子是一种人工合成的C因子，它被细菌内毒素活化后，可与荧光底物作用产生与内毒素浓度成比例的荧光信号。

2003年，Jeak Ling Ding等酵母重组表达C因子，Lonza公司得到了该生产工艺的授权，并商业化了产品PyroGene重组C因子内毒素检测试剂盒，用于鲎试剂内毒素检测方法的有力补充。此外，半个世纪以来，Lonza拥有包括细菌内毒素检测试剂盒、内毒素检测软件、全自动内毒素检测仪器在内的一站式解决方案，符合FDA 21 CFR part 11和欧盟EU GMP 附录11法规要求，以服务于各类细胞制剂生产企业、制药企业质控部门，可植入医疗设备和透析样品质控以及科研院所等相关机构，其服务对象覆盖70%的制药100强企业，已用于国外大量药物的放行上市，满足出口型制药企业的规模化热原测定需求。

重组C因子内毒素检测法具有更高的特异性，更好的专属性、精密度、准确度、线性范围及定量限，是目前鲎试剂内毒素检测方法的改良方法。重组C因子不依赖动物源性成分，提供更高的供应安全性，重组表达生产，产品批间一致性良好，终点荧光测定，与其他定量鲎试剂方法相当。

此外，由于内毒素特异性，重组技术消除了鲎试剂中β-1,3-葡聚糖对检测结果的干扰，避免潜在假阳性的产生。由于重组C因子可替代传统鲎试剂的优势，重组C因子被逐步推广。

目前，重组C因子已得到各国法规的认可，各国药典相继引入重组c因子。其中欧洲药典明确表明重组c因子可用于内毒素检测，并正式写入2.6.32章节，美国和日本药典均已将重组c因子引入至对应指导原则章节。中国药典2020版也在“<9251>细菌内毒素检查法指导原则”中正式体现。

近期，Lonza应美国药典 (USP)的请求研发了一组数据集，用于美国药典正式纳入重组C因子内毒素检测法的数据需求。

美国药典相关方法章节：USP <1085.1> USE OF RECOMBINANT REAGENTS IN THE BACTERIAL ENDOTOXINS TEST—PHOTOMETRIC AND FLUOROMETRIC METHODS USING RECOMBINANTLY DERIVED REAGENTS

本期医直播课堂邀请到Lonza全球专家Allen L. Burgenson，将在2022年04月19日（星期二）19:30-20:30上线一场主题为“不同内毒素检测方法在四种典型非肠道药物中的测定比较”的线上直播课程，全球专家Allen L. Burgenson将向中国听众分享这些最新的数据。

直播课堂

直播题目：不同内毒素检测方法在四种典型非肠道药物中的测定比较

直播时间：2022年04月19日 19:30到20:30

课程主题：

➤ 是否可以使用 LAL 和重组方法检测来自本土细菌的内毒素？

➤carbon bed处理后的水样品中是否存在葡聚糖？

➤ 如何使用 LAL 和重组方法测量最终产品中的内毒素

➤ 浊度法、显色法、重组rFC法之间的异同点

中英双语PPT，问答环节有翻译，内容精彩，欢迎报名参加！

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