2022-07-15 08:18:10, 星标关注 上海欧易生物医学科技有限公司
拿到转录组报告之后,想要自行剔除样本或者调整分组重新进行完整差异和富集分析,该怎么办?今天,小编介绍的这一款欧易云平台分析利器:转录组差异富集分析工具,将一键解决各位老师在常规转录组分析中最核心的需求。
话不多说,先上链接。(文末点击“阅读全文”可直接查看)
https://cloud.oebiotech.cn/task/detail/rna-diffenrich-oehw/
定睛一看,直观简约!
接下来,小编将为您详细介绍这款工具的使用方法。
文件准备
转录组差异富集分析工具需要(且必须)导入3个文件(包)。
第一个是数据文件包,包含分析过程用到的7个背景文件(夹),它们分别是:
counts.xls:基因(转录本)reads count文件。
fpkm.xls:基因(转录本)fpkm文件。
annotation.xls:基因(转录本)注释文件,用于为基因和差异基因添加注释。与物种相关(基因组版本固定,则该文件固定,下同)。
go.backgroud.xls:基因(转录本)GO注释背景文件,用于GO富集分析,与物种相关。
kegg.backgroud.xls:基因(转录本)KEGG注释背景文件,用于KEGG富集分析,与物种相关。
anno-kegg.backgroud.xls: 基因(转录本)KEGG注释背景文件,用于差异基因的KEGG map展示,与物种相关。
html_png/:物种KEGG html和png文件,用于差异基因的KEGG map展示。与物种相关。
温馨提示:以上7个文件(夹),已存放在欧易生物新版常规转录组报告的result/OECloud_tools(或者result/5.additional)文件夹中,压缩并命名为data.zip,无需修改直接导入。如果您的报告为旧版,可以联系我们,我们会第一时间为您提供可直接用于分析的数据文件包。
第二个文件是样本与分组的对应关系文件,格式如下:
温馨提示:如果您只想取部分样本进行差异分析,无需改动数据文件包中的counts.xls和fpkm.xls文件,只需在此文件中保留对应样本信息即可,不在该文件中的样本则不参与分析哦。
第三个文件是分组比较文件,格式如下:
该文件一共七列:
第一列是实验组样本,以逗号分隔。
第二列是实验组名,用于差异图表展示。
第三列是对照组样本,以逗号分隔。
第四列是对照组名,用于差异图表展示。
第五列为是否是重复,是则填写yes, 否则为no。
第六列是配对信息,是配对分析则填写yes, 否则为no。
第七列是差异分析软件(DESeq或者DESeq2)。
重点说明
1、 只要不是1 vs 1比较(2个样本间比较),其余情况第五列均须填写yes。
2、 DESeq2只能用于重复比较,不可用于非重复比较。
3、 配对分析只能用DESeq2,且实验组与对照组样本数必须一致,且配对样本填写的顺序需要一致。比如A1与C1、A2与C2、A3与C3 为配对样本,则配对分析实验组为A1,A2,A3,对照组为C1,C2,C3而不能填写为C1,C3,C2。
参数说明
差异倍数:不填写时,则默认为2。
数据类型:可选项为gene,mRNA,请根据实际情况选择,在输出文件中和部分图表中会有相关展示。
P值和q值(fdr校正后的p值):原则上只能选择一个,都不填写默认标准为p小于0.05。只填写一个则以该标准进行筛选,若都填写,则以q值为准。
部分分析结果示例
FPKM箱线图
PCA图
相关性聚类热图
差异基因聚类热图
差异基因火山图
GO富集柱状图
KEGG富集气泡图
KEGG map图
以上为转录组差异富集分析工具的使用说明与部分结果示例。本工具得到的表达统计,差异统计和富集结果格式与内容与常规转录组报告一致,并且会在后续更新中与常规报告保持同步。
因为该工具运行需要一定资源,所以在任务较多时,可能会进行排队。同时也需要一定的运行时间(根据差异分组数量不同,运行时间从十几分钟到几个小时不等) 。在提交任务前,务必要保证数据文件格式的正确性和样本名的一致性,避免分析失败和错误。
在使用过程中,有任何问题、建议以及需求,您都可以通过问题反馈告诉我们。为您提供全面、专业,细致的服务,是欧易生物一贯的宗旨。
近期活动
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END
麻辣双椒 撰文
本文系欧易生物原创
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