【色谱知识】手动积分的原则和管理

CFDA紧跟FDA的步伐，在2016年度多次飞检中，开具多条数据完整性方面的缺陷，收回多张GMP证书。关于手动积分并没有开具缺陷，制药企业应防患于未然，提前把手动积分管理好。

关于手动积分，并没有指南给出明确的定义。笔者只查到有两篇生物样本分析的方法验证指南规定了再积分(Reintegration)的注意事项。

　　FDA的2001年定稿指南 Bioanalytical Method Validation，及相应的2013年草案指南也有类似的要求。 生物样本分析的方法验证2013草案指南，第III.C节“样本数据再积分”规定：SOP应该确定再积分的标准，和怎样进行再积分;应清楚描述、并记录再积分的理由;应报告原始和再积分数据。第VII.D节还规定：再积分数据应有管理人员授权再积分。


　　EMA的2011年指南 Guideline on bioanalytical method validation，第5.5节规定：应该有SOP描述色谱的积分和再积分。应在分析报告中讨论偏离这个SOP的任何偏差。应该记录色谱积分、再积分的积分参数、初始积分数据、最终积分数据，并在要求时立即可得。

1)低分离度或低响应;

2)流动相不稳定，基线紊乱，保留时间变化小;

3)运行过程中，出现异常峰;

4)软件积分的局限性，如由于软件参数阈值的设置导致峰未积分，峰起点和终点间出现肩峰和异常的基线漂移，软件错误(峰未积分和错误识别峰);

5)由于样品母体的干扰导致的复杂色谱图：裂峰、目标杂质的同时洗脱/肩峰、基线噪音、负峰、基线上升或下降(由于某些梯度程序)、峰的严重拖尾、烃类的存在导致自动积分不正确。

操作员在数据系统自动积分不正确时，领取手动积分处理报告表并填写，手动积分申请被QC经理批准后由QC经理或QC组长(若有)或其指定人员(一般是指经验丰富的资深QC)方可进行手动积分。

1)手动积分不能试图通过以下动作来使数据符合标准要求：减少峰(减少峰面积);增加峰(增加峰面积);改变峰高;

2)同一次检验的所有标准品、工作对照品、样品等必须使用同一方法进行手动积分。

3)手动积分结束后，应打印自动积分图谱和手动积分图谱附于手动积分申请表之后，提交QC经理审核;QC经理应复核完整的数据找出根因，基于根因制定相应的CAPA措施来避免类似事件。

4)自动积分的图谱不得删除或被覆盖，应与手动积分图谱保存于计算机中;打印的自动积分图谱和手动积分图谱应标识清楚签名，随同手动积分申请表附于检验原始记录后面一起交质量管理部经理、QP审核无问题后归档。

满足合规要求的色谱软件(例如Waters和Angilent的软件)，能够分别设置不同权限，例如普通化验员不具备进行手动积分的权限，需要主管进行操作，有些软件则不具备这些功能;即使是同一个品牌的软件，也有不同版本;即使软件有这个功能，企业也不一定启用。

有两个信息是否显示，对色谱数据透明度非常重要：方法名称和数据版本。

如果企业不使用手动积分(重画基线)，而采用修改参数的方式，则每修改一次，是不同的方法(规范的管理程序会要求更改方法名称保存，否则就只能到审计追踪才能查出来这个方法已经被修改了)，而打印的色谱图可以选择是否显示方法; 每处理一次数据，会形成一个数据版本，同样的，打印的色谱图可以选择是否显示数据版本。一个完全透明的结果显示，会在打印的色谱图上显示“方法名称+数据版本”(同时要求修改参数则改变方法名称，不需要QA或检查员仔细检查审计追踪才能发现修改痕迹)。