应用速递：火锅底料中吗啡、可待因等5种非法添加物的测定(UPLC-MS/MS)

2022-05-19 20:18:29, 默克分析化学默克生命科学

前言

罂粟壳又名“御米壳”，俗称“米壳”，为罂粟科植物罂粟的干燥成熟果壳，含有20多种生物碱，以吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁、蒂巴因5种异喹啉型生物碱为主。由于罂粟壳的易成瘾性，曾有报导一些不法商贩会将其加入火锅底料中，以达到吸引消费者的目的。消费者长期食用含有罂粟壳的食物，对人体肝脏、肾脏具有毒性损害作用，会使人成瘾、记忆性能衰退，严重可能对神经系统和消化系统造成损伤，甚至呼吸衰竭。鉴于此，我国早在2000年已经将罂粟壳归类为“其他毒品”，2008年，中国卫生部发布《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单(第一批)》，罂粟壳就被列为非食用物质，严格监管，禁止在食品中添加。

目前，罂粟壳生物碱的定量测定方法主要有气相色谱法、液相色谱法、气相色谱-质谱联用法和液相色谱-质谱联用法。其中，气相和液相色谱法因复杂基质易产生假阳性，气相色谱法、气相色谱-质谱联用法样品需衍生化处理，超高效液相色谱-质谱联用法（UPLC-MS/MS）因选择性好、重复性好、灵敏度高应用愈来愈广泛。本应用采用QuEChERS方法进行预处理，并使用Ascentis^® Express HILIC表面多孔色谱柱建立火锅底料中5种罂粟壳生物碱的UPLC-MS/MS分析方法，该方法稳定、高效，可准确定量上述五种生物碱，为调味料中非法添加物的测定提供借鉴。

样品前处理

称取2g试样于50mL聚四氟乙烯具塞离心管中，加入60μL同位素内标(吗啡-D3、可待因-D3)工作溶液（5.0μg/mL），液体样品、半固体样品加入1-3mL水、固体样品加入5mL盐酸溶液。再分别涡旋振荡30s，准确加入15mL乙腈，密塞，涡旋振荡1min，超声处理30min，取出，加入Supel™ QuE乙酸提取管中的无机盐(55234-U)，立即涡旋振荡2min，使吸附样品中的全部水分，以4000r/min离心5min，取上清液，以0.22μm滤膜过滤。取续滤液适量，进样，用于测定吗啡、可待因；准确量取续滤液1mL至20mL量瓶中，用乙腈稀释至刻度，摇匀，进样，用于测定罂粟碱、那可丁、蒂巴因。

色谱/质谱条件

色谱/质谱参数
色谱柱	Ascentis^® Express HILIC, 2 μm, 10 cm × 2.1 mm (51409-U)
流动相	A: 甲酸乙腈溶液（0.1%） B: 含0.1%甲酸的10mmol/L甲酸铵溶液梯度洗脱程序见下表
流速	300 μL/min
进样量	5.0 μL
柱温	35 ℃
离子源	ESI⁺
扫描方式	MRM

梯度洗脱程序
t/min	A (%)	B (%)
Initial	95	5
1.00	95	5
6.00	85	15
6.50	60	40
8.00	60	40
8.10	95	5
12.00	95	5

扫描离子对
吗啡	286.0/181.3; 286.0/165.3
可待因	300.4/215.2; 300.4/165.4
罂粟碱	340.4/202.2；340.4/171.1
那可丁	414.4/220.5；414.4/353.3
蒂巴因	312.3/58.3；312.3/249.1
吗啡-D3	289.0/185.1；289.0/201.1
可待因-D3	303.0/215.2；303.0/165.2

实验谱图

图谱一：吗啡、可待因、罂粟碱、那可丁和蒂巴因的标准品色谱图（10μg/L）

图谱二：火锅底料基质空白色谱图

图谱三：火锅底料基质加标样品色谱图

总结

吗啡、可待因、那可丁、罂粟碱和蒂巴因均为极性较强的化合物，在常规C18色谱柱中保留较差。因此，本实验选用HILIC亲水模式加强5种化合物在色谱柱中的保留。此外，吗啡和可待因的分子结构式非常相似, 二者的差异仅在与苯环相连的1个基团 (羟基, 甲氧基) , 使用全多孔HILIC色谱柱分离时，吗啡和可待因无法完全达到基线分离.

而本实验中的Ascentis^® Express HILIC表面多孔色谱柱 (填料结构如下图所示)，由于其异于全多孔硅胶颗粒的结构，在相同的柱压条件下，柱效比同粒径全多孔颗粒高40%，因此吗啡和可待因可以得到有效分离。

表面多孔硅胶

填料结构

本实验对火锅底料样品进行方法确认。吗啡、可待因、那可丁、罂粟碱和蒂巴因五种目标分析物标准品在0.01μg/ml~0.1μg/ml内取得了良好的线性关系（r2＞0.995）。精密度及三个浓度点（0.02mg/kg, 0.04mg/kg, 0.08mg/kg）的加标回收率均满足实验要求。对流通市场抽取的火锅底料样品进行测定, 均未检出上述5种罂粟壳生物碱。

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