方案速递！GB 31656.11-2021 水产品中兽药残留量的检测

本方案适用于鱼、虾、蟹、鳖及海参等水产品可食组织中土霉素、四环金、金霉素和多西环素残留量的检测。

(1) 单标储备液：分别称取适量盐酸四环素、盐酸土霉素、盐酸金霉素及盐酸多西环素，用甲醇配制成1.0mg/mL的单标储备液；

(2) 混合标准中间液：分别吸取适量单标储备液，用甲醇配制成1.0μg/mL和0.1μg/mL的中间液。

(1)取2.0g样品于50mL离心管中，加入6mL Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲液^*和2mL乙酸铅溶液^*，涡旋混合1min，超声10min，8000rpm离心2min；

(2)取出上清液，然后下层残渣依次加入5mL、5mL Na₂EDTA- Mcllvaine缓冲液，按照步骤(1)重复提取2次；

(3)合并三次提取液，并用Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲液定容至20mL；

(4)加入10mL正己烷，涡旋混合1min，8000rpm离心2min，取下层清液10mL待净化。

^*Na₂EDTA-Mcllvaine缓冲溶液(pH 4.0)：称取磷酸氢二钠(Na₂HPO₄·12H₂O) 27.6g、柠檬酸(C₆H₈O₇·H₂O) 12.9g、乙二胺四乙酸二钠盐37.2g，用水溶解后稀释并定容至1000mL。

^*乙酸铅溶液：称取20g乙酸铅，用水定容至1000mL。

ProElut PLS  60mg/3mL (Cat.#: 68003)

(1)活化：依次用5mL甲醇、5mL水活化；

(2)上样：加入待净化液，弃去流出液；

(3)淋洗：依次用5mL 水、5mL 5%甲醇水淋洗，弃去流出液，小柱真空负压抽干5min；

(4)洗脱：加入5mL 乙酸乙酯-甲醇(1:9)溶液，推干小柱，接收全部流出液混匀； 

(5)重新溶解：将流出液在45℃下氮吹近干，用初始流动相定容至1mL，过Nylon膜(Cat.#: 37177)，供LC-MS/MS分析。

注：同方法制备基质匹配标准溶液。

UPLC条件     

色谱柱：Leapsil C18, 100x2.1mm 2.7μm (Cat#：86005)

流速：0.2mL/min

进样量：5μL

柱温：35℃

流动相：A:0.1%甲酸水溶液 B:乙腈

梯度设置：

质谱条件

电离模式：ESI

扫描方式：正离子扫描

检测方式：多反应监测

电喷雾电压：5500V

雾化气压力：50psi

辅助气压力：50psi

气帘气压力：20psi

离子源温度：500℃