保健品中的功能性成分分析

      不饱和脂肪酸具有预防动脉硬化和血栓、改善视力和过敏症状等多种功效。这次对ω-3系脂肪酸DHA（二十二碳六烯酸）、EPA（二十碳五烯酸）等不饱和酸进行了分析。

      使用含有EPA、DHA的市售保健品作为样品。用刀把软胶囊切开，取出高粘度的内容物，量取10mg，加入2ml乙醇使其溶解。过0.45μ滤膜，作为测试溶液。

      HPLC使用聚合物基质反相色谱柱Shodex Asahipak ODP-50 4D，能通过梯度条件分析5种不饱和酸。如图1所示，在对保健品样品的检测中，5种不饱和脂肪酸被洗脱后，保健品中所含的杂质也被洗脱了。因此，可以使用等度法进行样品中杂质的洗脱。

      通过使用100%乙腈作为流动相，可以实现杂质成分的洗脱。另外，在标准样品的色谱图中可以看到20分钟以后的基线变动是由梯度条件变化引起的。

      EPA和DHA在1~100μg/mL的浓度范围内获得了线性高的检量线。与样品成分上标示的数值（EPA:350mg,DHA:80mg）相比，测试结果324mg和75mg，回收率高达90%以上，可以定量。另外，实现了不受样品中杂质的干扰进行分析。

图1.不饱和脂肪酸标准品和保健品的谱图

      茶氨酸是茶叶中含有的一种氨基酸，主要具有抗压和放松的效果。

      以下是市售的含有茶氨酸的保健品的前处理方法。用刀切开软胶囊，取出高粘度的内容物，在5mg内容物中加入5ml流动相，超声10分钟，过0.45μ滤膜后，作为测试溶液。

      色谱柱使用聚合物基质氨基柱Shodex Asahipak NH2P-50 4E，进行HILIC分析。HILIC模式使用高极性填料的色谱柱以及高极性的流动相，非常适用于高亲水性物质的分析。如图2所示，可以在不受杂质影响下分析茶氨酸，在0.001~1mg/mL浓度范围内均能得到直线性良好的标准曲线。和成分标识相比，回收率能达到约90%。

图2.茶氨酸标准品和保健品的谱图及检量线

α-GPC的分析

      α-GPC（L-甘油酯磷酸化胆碱）是一种天然存在的胆碱衍生物。它是作用于副交感神经的乙酰胆碱的前体，可能作为改善脑功能的药物来治疗阿兹海默病。

      取市售的含有α-GPC的保健品胶囊的粉末状内容物10mg用5mL流动相溶解，超声10分钟。取上清液过0.45μ滤膜，作为测试溶液。

      分析用色谱柱与茶氨酸分析一样，使用聚合物基质氨基柱Shodex Asahipak NH2P-50 4E，利用HILIC模式分析α-GPC。在保健品样品中几乎没有检测出杂质，只检测出α-GPC峰。据推测，这可能是由于保健品中的其他成分均不能溶解于流动相，只有α-GPC能溶解。

      经过定量性确认，在0.05~1mg/mL的浓度范围均能得到直线性良好的检量线，和成分标识相比，回收率几乎达到100%。

图3.α-GPC标准品和保健品的谱图

      五层龙的提取物有抑制血糖上升的效果。另外，由于抑制糖的吸收，还具有控制体内脂肪及改善肠道环境的功效。

      首先将市售含有五层龙提取物的保健品一粒至于研钵中碾成粉末。取0.1g加1mL超纯水，超声10分钟。超声后离心分离，取上清液添加等量乙腈。再用50%乙腈稀释10000倍，作为测试样品。

      使用聚合物基质HILIC色谱柱Shodex HILICpak VT-50 2D进行LC/MS/MS分析。结果如图4所示，根据两种样品的分子量信息，确定了各自的峰，因此可以确认此色谱柱可以分析Salacinol和Kotalanol。

图4.五层龙提取物的谱图

      辅酶Q10是肉类、鱼类等食品中含有的脂溶性物质。也被称为泛鲲，作为类似维生素类物质被熟知，还有抗氧化和抗衰老的效果。

      以下是市售含有辅酶Q10的保健品的前处理方法。用刀切开胶囊，取出高粘度液体内容物5mg，加入5mL流动相溶解，超声10分钟，过0.45μ滤膜作为测试样品。

      色谱柱使用ODS色谱柱Shodex Silica C18P 4D，利用反相模式分离。分析结果如图5所示。辅酶Q10和杂质可以分离。在0.001~1mg/mL的浓度范围内可以得到直线性高的检量线。和标识数值相比，能得到约95%的良好回收率。被测保健品标示含有维生素C，考虑1分钟附近的峰为维生素C的杂质峰。

图5.辅酶Q10和保健品的谱图

总结

      此次采集数据的功能性成分均可以使用Shodex色谱柱进行分析。此外，可以在不受样品中杂质的干扰分析功能性成分。

      Shodex色谱柱非常适合运用于食品中功能性成分的分析领域。