2021-11-05 11:21:10, 共享未来的 深圳华大智造科技有限公司
2021年10月15日,艾吉泰康®全新版人全外显子组测序产品——艾全外®V3正式上市。目前,艾吉泰康®已正式发布艾全外®V3核心版、遗传版,后续将推出艾全外®V3肿瘤版,同时已支持客户基于核心版或遗传版灵活定制增加区域,如HLA、MSI、Fusion等,并提供专业研发团队一对一的专享服务。
关于艾全外®V3
艾全外
®
V3依据参考基因组GRCh38及补丁序列设计,可真实覆盖人类基因组约34.4Mb的CDS区域。艾全外
®
V3探针设计大小仅为38.5Mb,确保对蛋白质编码区域最大程度覆盖,同时对参考基因组补丁序列、高重复区、高GC区等均进行了探针的优化覆盖,覆盖度、捕获效率及均一性等重要性能指标均表现卓越。华大智造测序平台中,MGISEQ-2000以灵活高效著称,DNBSEQ-T7则具有超高通量的特点,均可适配临床、科研和检测服务等各类应用场景,本期将带来艾全外®V3核心版在MGISEQ-2000、DNBSEQ-T7平台的实测数据展示。
测试方案
该实验分别采用标准品NA12878(S1,S2,S3,S4)和同卵双生家系样本(F1, F2,F3,F4)进行测试,文库构建采用艾吉泰康®的Enzyme Plus Library Prep Kit进行酶切单端、双端index建库,TargetSeq One®体系进行捕获,探针为艾全外®V3,后续分别采用MGISEQ-2000、DNBSEQ-T7,PE150进行测序,每个样本抽取8G Raw Bases进行统计分析。
以下为各个样本的建库测序信息:
注:以上试剂均为艾吉泰康®自有产品,客户可联系订购。
测试结果
1.数据指标表现优异
每个样本抽取8G Raw Bases的结果显示,MGISEQ-2000/DNBSEQ-T7平台的Target Duplication rate均在3.8%以内,且所有样本的有效深度均在100X以上。这表明,客户在MGI平台测序,可以极大地降低Duplication rate,相同数据量下,可以获得更高的深度,有效地保证了数据的利用率。
图1 艾全外®V3在MGI平台的实测Duplication rate
图2 艾全外®V3在MGI平台抽取8G的实测有效深度(X)
实测数据显示,当测序数据量达到54G Raw Bases时,目标区域深度大于700X,Target Duplication rate在9%以内,远远低于其他测序平台常规100X的Target Duplication rate。这表明,在需要高深度测序的应用场景下,比如肿瘤全外检测,华大智造测序平台可以极大的节省数据量。
在本次实测中,我们可以看到8例样本在MGISEQ-2000/DNBSEQ-T7平台的reads捕获效率(Target reads capture rate)平均为75%,侧翼中靶率(Flank reads capture rate)平均在80%,且不同样本不同平台间均表现稳定。
图3 艾全外®V3在MGI平台的实测捕获效率
同时,艾全外®V3在MGISEQ-2000/DNBSEQ-T7平台的均一性指标同样表现出色。20%X覆盖度 (T 20%X coverage rate)均高于99.1%,50%X覆盖度 (T 50%X coverage rate)均高于91.5%。
图4 艾全外®V3在在MGI平台的实测均一性
2.变异检出准确率高
对细胞系NA12878样本的突变位点(SNP和InDel)的检出情况进行分析,比对预期变异数量,艾全外®V3变异位点的实际检测情况与预期高度一致。结果显示,SNP检测的精确性(Accuracy)超过99.3%,InDel检测的精确性超过 90.6%,同时SNV和InDel检测的灵敏度(Sensitivity)分别在99.3%和97.3%以上。
3.基因组高GC区与高重复区覆盖度好
代表区域一:TERT启动子区
TERT启动子区发生变异会增加端粒酶的活性并促进肿瘤的发生,该区域与TERT的转录激活有着高度相关性,但是TERT启动子区由于GC含量在85%以上,捕获难度较高。本次测试的5例样本,在平均深度100X的条件下,TERT启动子区的-124和-146位置(chr5:1295113,chr5:1295135,hg38)深度均在60X深度以上,且在TERT启动子区展现出较好的覆盖度。
图5.TERT启动子区IGV实测数据展示
代表区域二:PKD1基因
PKD1基因与常染色体显性多囊肾病高度相关,但由于区域内存在高GC区与高重复区,检测难度较大。本次测试的5例样本结果显示,PKD1基因CDS区的4X覆盖度均为100%,20%X覆盖度均在99%以上。由此可见,艾全外®V3可有效提高PKD1的检出率。
图6.PKD1基因CDS区实测覆盖度统计
测试总结
以上为本次MGISEQ-2000/DNBSEQ-T7对艾全外®V3的实测数据展示。从以上测试结果可以看出,无论是华大智造单端、双端Index建库,还是MGISEQ-2000、DNBSEQ-T7平台测序,艾全外®V3在捕获效率、均一性以及变异检出准确性均展现出稳定且优异的性能。作为国产测序平台应用生态联盟的成员,华大智造与艾吉泰康®强强联合,利用自身技术优势,携手打造中国基因测序产业新生态,为客户提供了从文库构建、目标区域捕获、上机测序到数据分析的整体技术平台。为回馈新老客户,艾吉泰康®已开展百例艾全外®V3探针免费测试活动,欢迎大家参与测试。
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