原来蛋白沉淀可以这样做？！

2021-09-17 12:30:57 拜泰齐贸易（上海）有限公司

在诸多常用生物样本前处理方法中，蛋白沉淀（Protein Precipitation，PPT）法是操作和流程最简单、成本最经济、操作者接触和应用比例最高的一种，通常只需要将样品和沉淀剂（甲醇、乙腈等）按一定比例混匀后离心取上清即可。

然而看似简单的流程，真正操作起来还是有一些令人“尴尬”的步骤，如：

1）96孔板通常不能承受较大离心力而影响离心效果，微量离心管又不能满足通量操作的需求；

2）需要多次的液体转移操作，步骤烦琐并容易引入人为误差；

3）混匀和离心过程有时要加盖开盖，存在交叉污染风险；

4）相关设备较多，设备投入和人工投入大，难以自动化或半自动化等等。

正因为以上这些原因，操作更简单的ISOLUTE PPT+蛋白沉淀板被越来越多地接受和应用到蛋白沉淀，因为它简单高效，只需按下图操作即可，免除了涡混、摇匀、加盖开盖、离心取上清等操作，步骤更少、流程更简单、耗时更短，帮助个人效率和产出成倍提高。

为什么ISOLUTE PPT+可以做到这些？而一块合格的蛋白沉淀板又需要具有哪些特质呢？

一 . 溶剂先加模式(Solvent First)

一般的蛋白沉淀板，受限于采用的筛板或滤膜，通常只能采用先加样品再加沉淀剂的模式，即样品先加（Sample First）。所谓溶剂先加模式，就是允许先加沉淀剂，再加样品，在此过程中溶剂不会滴落。这对蛋白沉淀板过滤系统的材质和处理工艺提出了较高的要求，也是合格的蛋白沉淀板同普通过滤板的主要区别。

为什么要先加溶剂？我们将同一来源的100 µL血浆分别按照溶剂先加和样品先加的模式用ISOLUTE PPT+进行蛋白沉淀，滤液挥干后残留物称重，与未经沉淀而直接挥干的100 µL血浆的残留物重量做对比。

结果看到，样品先加模式去除了64%的内源性物质，而溶剂先加模式去除了90%的内源性物质，说明溶剂先加模式的蛋白沉淀效率更高，效果更好。

我们将两种模式得到的残留物，分别用相同体积的含咖啡因1 µg/mL的流动相复溶后，每份5 µL不通过色谱柱而直接注入质谱的电喷雾离子源接口进行分析，并与含同浓度咖啡因的流动相做对比，结果显示相比样品先加模式，溶剂先加模式的离子抑制效应更低，信号响应提高了37%。

二．高纯度材料

ISOLUTE全系列产品都采用了高标准的洁净材料，是同类产品中溶剂提取物最干净、杂质干扰最低的一款产品，不会额外增加提取物的离子抑制效应和对目标物的干扰。

三．优化的过滤系统

合格蛋白沉淀板的过滤系统不但要溶剂支撑能力支持“溶剂先加”模式，而且要能支撑足够长的时间，在加压之前不会发生滴漏，以免影响实验结果。另外很重要的一点是在保证过滤颗粒效能的同时能有效防止堵塞。

ISOLUTE PPT+采用大孔深层过滤器结合微孔筛板的双层过滤系统，支撑甲醇、乙腈、水等溶剂12小时以上不发生滴漏，有效过滤颗粒的同时不会因沉淀而发生堵塞。

综上，您在选择蛋白沉淀板时应该考察其溶剂支撑、防漏防堵、材料洁净度等方面，保证您选择的是真正的蛋白沉淀板而不是普通的过滤板，以保障您的使用体验和实验结果。

ISOLUTE PPT+蛋白沉淀板作为蛋白沉淀的新选择，简化了样品前处理的流程，缩短了样品前处理的时间，降低了设备和人工投入，减少了人为误差，并可简单地实现自动化和半自动化操作，提高样品处理通量和工作效率的同时保证了实验结果的准确性和可靠性。

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