多球、共培养、3D肿瘤试验，实时活细胞分析！

越来越多的证据表明，与2D单层细胞模型相比，涉及微组织和类器官的研究能提供更多的预测性和转化观察结果。多细胞肿瘤球在肿瘤学和肿瘤免疫学研究中的应用也在增加。

目前用于评估肿瘤球体生长和缩减的方法通常受到耗时、昂贵和、或费力的分析工作流程的限制。这可能包括荧光探针的生物学干扰，终点法分析可能错过有见地的时间点信息，或间接生化读数忽略有价值的形态学洞察力。

Vitanovski/Getty图像

本文展示了验证方法和数据，以阐述Incucyte® 活细胞分析系统的能力，包括动态可视化和量化基质细胞对肿瘤多球形态及对化疗药物敏感性的影响，并评估免疫细胞介导的对肿瘤多球的杀伤毒性。

数据结果抢先看

Incucyte® S3孔板视图可以快速可视化和定量处理效果。MCF7细胞与NHDFs共培养，接种于预包被（Matrigel）的平底96孔板（1:1比例，各1000细胞/孔），形成多球（3天）。然后用已知的标准护理和梯度稀释的细胞毒性化合物处理球体（5天）。Incucyte® 微孔板视图显示了处理对多球大小的影响。顶部图像显示处理后5天明场目标面积（Brightfield Object Area，μm2）识别mask（黄色）。底部图像显示每孔总明场目标面积（Total Brightfield Object Area，μm2）（y轴）随时间的变化（处理后0–5天）（x轴）。

赫赛汀诱导的PBMC对多球增殖的影响。将稳定表达核RFP（SKOV3-NR、MCF7-NR）或胞质GFP（BT-474-CyG）的肿瘤细胞接种于平底96孔板的Matrigel上（1000细胞/孔），形成多球体（3天），然后加入新分离的PBMC（E:T，5:1）和赫赛汀。Incucyte® S3明场和荧光图像（7天，SKOV3-NR、MCF-NR；或10天，BT-474-CyG），对比未加入PBMC（上图）和加入PBMC（下图）的情况下，赫赛汀对肿瘤球增殖的影响（明场mask显示为黄色）。注意在PBMC存在时HER2阳性（SKOV3和BT474）多球体荧光强度的损失。

HER-2阳性多球的ADCC免疫细胞杀伤的动态量化。肿瘤细胞接种于96孔平底板的Matrigel上（1000细胞/孔），形成多球（MS）3天。一旦形成，MS与新鲜分离的PBMCs（E:T，5:1）共培养，并用连续稀释的赫赛汀处理。时间进程显示多球体的死亡，通过球体明场目标内荧光强度的损失进行量化。赫赛汀的浓度响应曲线显示HER2阳性多球体（SKOV3和BT-474）之间的敏感性差异。激活的T细胞群（抗CD3和IL-2，10 ng/mL）处理，导致了所有细胞类型的最大MS细胞毒性。每隔6小时收集数据，总计10天。每个数据点代表平均值±SEM，n=4孔。