2021-05-19 18:06:21, 小迈 武汉迈特维尔生物科技有限公司
肠道菌群失调会通过NLRP3促进肝病进展
Intestinal dysbiosis augments liver disease progression via NLRP3 in a murine model of primary sclerosing cholangitis.
● 期刊:Gut
● IF=17.016
● 发表时间:2019.3.14
研究背景
研究背景:原发性硬化性胆管炎(PSC)是一种特发性、慢性、胆汁淤积性肝病(CLD),PSC常发展为肝硬化,并有发展为胆管癌和胆囊癌的显著风险。小鼠多药耐药蛋白2的遗传缺失(Mdr2−/−) 与人类PSC过程极为相似,是研究疾病进展相关PSC依赖机制的合适PSC动物模型。在核苷酸结合寡聚化域样受体-炎症小体复合物中,NLRP3(也称为NALP3)炎症小体的特征最为广泛,是一个重要的信号传导节点。NLRP3激活与许多肝病的发病机制有关,NLRP3也有助于维持肠道内环境平衡和调节肠道微生物群,进而影响肠道和远端器官。PSC和肠道微生物失调有显著相关性,但微生物群对肠-肝串扰在PSC发病机制中的作用仍不清楚。此项研究旨在通过使用Mdr2−/−小鼠模型解剖肠道微生物群和肠道-肝脏串扰在PSC发病机制中的功能作用。
研究材料
Mdr2−/−小鼠、野生型(wt)对照小鼠、 Mdr2−/−/casp8双基因敲除小鼠。
PSC患者样本。
研究方法
LC-MS/MS、western blot、qrt-pcr、caspase活性测定、免疫染色、微生物群数据分析等。
研究思路
研究结果
1. Mdr2−/−缺乏导致胆汁淤积性肝损伤,caspase-8依赖性凋亡信号对Mdr2−/−小鼠疾病进展是不必要的。
在第8周和第52周时, Mdr2−/−小鼠的血清转氨酶(ALT)水平显著升高(图1A),血清碱性磷酸酶(AP)(图1A)和胆汁酸(图1B)显著增加,MDR2−/−小鼠的肝脏组织学表现出强烈的慢性导管周围炎性反应。这说明,Mdr2−/−基因的确实导致了胆汁酸的淤积,特别是具有疏水性的胆汁酸的积累,会引起胆汁淤积诱导的肝细胞死亡。Mdr2−/−肝脏显示出明显较高的半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-8表达(图1D和1E)。与杂交产生的雄性Mdr2−/−/casp8小鼠相比,雄性Mdr2−/−小鼠在12周和26周时转氨酶水平没有显著差异(图1I)。这些结果表明肝细胞中的caspase-8尽管具有很强的活化作用,但对Mdr2−/−肝的疾病进展是不必要的。
图1
◆ ◆ ◆ ◆ ◆
2. PSC患者和Mdr2−/−小鼠肝脏中的NLRP3炎症小体会显著激活。
为了研究NLRP3激活与PSC的相关性,对PSC患者和健康对照患者的肝脏切片进行NLRP3染色(图2A)。有趣的是,PSC患者的IHC显示NLRP3和IL1-β-阳性细胞显著增加;IL1-β-阳性细胞显示炎症激活,而健康对照组则没有(图2A和B)。8周龄和52周龄的Mdr2−/−小鼠肝脏的IHC显示NLRP3阳性细胞显著增加(图2C和D)。这些结果表明,Mdr2−/−小鼠的胆汁淤积性肝损伤是由显著的炎症激活介导的。
图2
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3. Mdr2−/−小鼠肠道微生物群组成会发生改变。
由于胆汁酸代谢的变化可能影响肠肝循环,从而改变微生物群的组成,文章研究了Mdr2−/−小鼠是否出现肠发育不良。基于Bray Curtis差异性的非度量多维标度(NMDS)分析显示52周大的Mdr2−/−和WT小鼠之间存在明显的分离(图3A)。与野生型小鼠相比,Mdr2−/−的微生物物种多样性降低(图3C)。通过对所有属进行计算性LDA效应大小(lefse)分析,梭状芽孢杆菌(Lachnospirae)在WT和Mdr2−/−Littermas之间最显著地调节(图3D)。这些数据表明,Mdr2−/−小鼠的肠道微生物群组成显著改变,并导致特定的微生物群特征。
图3
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4. Mdr2−/−微生物群的转移诱导健康WT小鼠肠道发育不良。
由于Mdr2−/−小鼠肠道微生物群组成的变化与NLRP3炎症激活增加有关,接下研究Mdr2−/−微生物群对肠道内环境平衡的影响。从Mdr2−/−或WT对照小鼠衍生的微生物群通过口服管饲转移到健康WT小鼠中1周,Mdr2−/−的粪便微生物转移(FMT),导致了血清转氨酶活性的显著增加(图4B),Mdr2−/−衍生微生物群的转移诱导了受体WT小鼠细菌群落结构的显著变化(图4H),总共12个细菌群显著上调,8个在微生物群转移中下调。在WT菌群转移时,只观察到三个组的微小变化,所有这些组都属于乳酸菌科(图4I)。
图4
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5. 泛半胱天冬酶抑制剂IDN-7314治疗减轻Mdr2−/−小鼠肝损伤、重塑微生物群组。
在Mdr2−/−肝中,发现不同的半胱天冬酶的激活,通过使用IDN-7314治疗来测试全身性的泛半胱天冬酶抑制性。用IDN-7314处理的八周龄的Mdr2−/−小鼠显示出明显的肝脏损伤,这是由各自的血清参数(图5A)所证实的。IDN-7314处理的Mdr2−/−肝脏的炎症减少,胆管增殖降低(图5B),血清中胆汁酸浓度显著降低(图5C)。
图5
IDN-7314治疗不仅显著改善了肝脏疾病并降低了血清胆汁酸浓度,而且也部分地逆转了Mdr2−/−微生物的特征(图6A),分析了泛半胱天冬酶抑制剂治疗对分离52周龄Mdr2−/−和WT小鼠的细菌的影响(图3D)。与wt微生物群相比,最初在Mdr2−/−中过度表达的Lachnospiraceae(otu2)现在在IDN-7314治疗后显著降低(图6A)。这些数据表明,caspase抑制可以通过重塑Mdr2−/−小鼠中的不利微生物群特征来调节胃肠道-肝脏串扰。
图6
研究结论
●Mdr2基因的缺失/PSC会引起胆汁酸异常、肠道菌群结构改变,从而引发肠道发育不良。NLRP3炎症小体激活也造成了胆汁酸的异常升高,继而导致更高的肝损伤。这个过程基本上不依赖肝细胞中的caspase-8,但可以被IDN-7314阻断。
文章延伸
迈维代谢不仅可以做文章中提到的胆汁酸的检测,而且也可以做代谢物和肠道微生物的关联分析,这样可以更全面的阐释代谢物、菌群与疾病之间的关系。
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