15年的等待！BLI技术正式列入《美国药典》（USP-NF）

2021-05-14 16:24:34, 陈老湿德国赛多利斯集团

Octet

被列入药典方法是每种技术梦寐以求的成就。基于生物层干涉技术（BLI）的Octet仪器自2006年第一台原型机的问世，凭借其高通量和简单易用的优点，迅速获得了广大药物研发企业和科研工作者的青睐。经过多年的技术积累和进步，Octet仪器以及传感器的精度和稳定性越来越好，在亲和力检测和浓度测定方面大放异彩，终于获得各国评审机构以及药典委员会的认可。在2020年底作为非标记检测方法的一种被列入《美国药典》检测分子相互作用的方法之一【1】，同时也被收入了药典有关Fc介导的效应功能活性评价方法的章节【2】。为此，Octet等待了15年！

我们会在近期举办的“赛多利斯高通量生物分析技术研讨会”上，对相关《美国药典》内容进行详细解读。

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Fc介导效应功能活性评价的背景和重要性

Fc即可结晶片段(Fragment Crystallizable)。用木瓜蛋白酶水解IgG（免疫球蛋白）分子，可得到两个Fab和一个Fc段。该片段能与效应分子和效应细胞上的Fc受体结合，使得抗体药物产生抗体依赖细胞毒性作用 (ADCC)，补体依赖细胞毒性作用（CDC）以及抗体依赖细胞吞噬作用（ADCP），也会影响抗体药物的半衰期。这些受体包括FcγR（I, IIa, IIb, IIIc, IIIa, IIIb）, C1q和FcRn。

各国有关生物大分子药物活性检测的指导原则都包含了Fc介导的效应功能活性评价，这是生物大分子药物质量属性研究的重要一环。

中国《生物类似药研发与评价技术指导原则（试行）》关于免疫学特性部分

《美国药典》1108章节简单解读

《美国2021版药典》1108章节目录

《美国2021版药典》1108章节目录关于BLI的描述

1108章节中关于BLI的描述：包括BLI技术的介绍，优缺点以及实验设计要素等。

优点
非标记，高通量，能提供动力学和浓度测定数据，半自动化

缺点
需要特定的设备和传感器，方法比较难转移

实验设计的考虑点

1	需要选择合适的传感器和实验方向（固化受体还是抗体药物）
2	通常FcγRs与抗体的结合比较弱，需要提高分析物的浓度
3	传感器上过量的固化会导致由于空间位阻、亲合作用、传质作用以及非特异性等原因导致的数据失真；而固化量太少又会导致信号的信噪比较高。
4	缓冲液条件需要优化，以尽可能降低非特异性，同时获得最佳结合条件。
5	结合步骤可以适当缩短，以减少次级结合的发生。

中检院也推荐用BLI做Fc介导活性表征

BLI技术写入药典证明了Octet分子互作分析系统有着良好的性能和表现，很多生物制药企业早已开始用Octet测试Fc受体/C1q与抗体药物的亲和力。中国食品药品检定研究院的生物制品质量标准研究实验室早在2016年就应用Octet系统建立了类似的检测方法，并发表了多篇文章。点击这里查看：中检院教你如何评价原研药与类似药的相似性。

Fc受体原料供应商也用BLI检测其活性

文中也提到采用高质量的Fc受体原料是成功建立亲和力检测实验的前提。这些原料生产公司本身也是用Octet系统来检测其产品的质量。参考他们的质检方法，往往可以帮助用户更快速的建立自己的检测方法！

厂家1的CD16a（FcγRIIIB）的BLI质检数据厂家2的CD16a（FcγRIIIB）的BLI质检数据

两家都是用HIS1K传感器固化CD16a，与不同浓度的抗体结合（厂家1是 Her2抗体，厂家2是Rituximab）

陈老湿曰

BLI技术被列入药典，对于Octet来说是一个里程碑事件！说明药物标准制定机构以及评审机构对BLI技术的充分肯定。这是建立在BLI技术已经被广泛应用并获得良好口碑的基础上！BLI技术的成功不仅是Octet系统的性能体现，也得益于多年来众多Octet用户和以陈老湿为代表的应用科学家们对BLI技术的成功开发和应用。陈老湿必须骄傲一把，哈哈~~~当然，我们会遵循严谨科学研究的态度，为大家提供更好的支持，欢迎大家点击阅读原文报名参加我们5月的技术研讨会!

”

-参考文献-

【1】USP<1105>IMMUNOLOGICAL TEST METHODS—SURFACE PLASMON RESONANCE

【2】USP<1108> ASSAYS TO EVALUATE FRAGMENT CRYSTALLIZABLE (FC)-MEDIATED EFFECTOR FUNCTION

关于1108章节的电子版的购买，可以到《美国药典》的官方网站(U.S. Pharmacopeia (usp.org))了解更多信息。