新规解读 | 快速梳理兽药制剂中 25 种化合物检测新方法

2021-01-16 15:09:07, 安捷伦科技安捷伦科技（中国）有限公司

新年新方法，说着这就来了！

2021 年 1 月 6 日，中华人民共和国农业农村部第 384 号公告发布，自发布日起执行《兽药制剂中非法添加磺胺类和喹诺酮类 25 种化合物检查方法》。本方法适用于黄芪多糖注射液、维生素 C 可溶性粉、硫酸卡那霉素注射液中非法添加的磺胺类和喹诺酮类 25 种化合物，以及其他兽药制剂中非法添加磺胺类和喹诺酮类 25 种化合物。

食品和兽药残留检测实验室会遵循现行法规和标准，建立众多可靠的液相分析方法，但每逢新标准发布，又面临着建立新方法时间紧、种类多、要求高、任务重的压力，而且新法规覆盖面更广、要求更高，也是势在必然的趋势。

项目这么多，时间这么紧，压力这么大，想静静都不行。不用愁！安捷伦这就来帮您梳理新标准，帮您如何快速创建新方法，且看下文：

分析设备

Agilent 1260 Infinity II Prime LC（下图左）或 Agilent 1290Infinity II LC（含二极管阵列检测器，下图右），搭配标准中使用的 Agilent EclipsePlusC18 RRHD，2.1 mm x 150 mm，1.8 μm 色谱柱。

图 1. 安捷伦液相色谱系统

分析试剂

甲酸（色谱纯）、三乙胺（分析纯）、乙腈（分析纯）、去离子水（默克 Milli-Q 实验室纯水机）。

色谱梯度

以 0.1% 甲酸溶液（三乙胺调节 pH 值至 3.40）为流动相 A，以乙腈为流动相 B，流速为每分钟 0.2 mL，柱温 25 ℃。

前处理

取液体样品 1.0 mL 或固体样品 1.0 g 置于 50 mL 量瓶中，加 60% 乙腈溶液至 40 mL，超声 5 min，静置至室温。加 60% 乙腈水溶液至 50 mL 刻度，摇匀，作为待测液。取 0.5 μL 上机分析。

检出限

本方法对磺胺脒、磺胺、磺胺二甲异嘧啶钠、磺胺醋酰、磺胺嘧啶、甲氧苄啶、磺胺吡啶、马波沙星、磺胺甲基嘧啶的检测限均为 100 mg/L 或 100 mg/kg，对氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星、达氟沙星、恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯达嗪钠、沙拉沙星、磺胺多辛、磺胺甲噁唑或磺胺异噁唑、磺胺苯甲酰、磺胺氯比嗪钠、磺胺地索辛、磺胺喹噁啉或磺胺苯吡唑的检测限均为 200 mg/L 或200 mg/kg。

图 2. 25 种化合物分离色谱图

结果分析

测试样品溶液与标准品对照溶液如何判定结果：

1. 保留时间一致（差异不大于 5%），判定为单一物质峰；

2. 保留时间一致，两者紫外光谱图匹配，最大吸收波长一致（差异不大于 2 nm），但峰面积小于检测限峰面积，判定为未检出；

3. 在规定采集波长范围内，两者紫外光谱图匹配，最大吸收波长一致（差异不大于 2 nm），峰面积小于检测限峰面积，判定为检出；

4. 保留时间接近，差异不大于 5% 时，可在处理好的样品中添加少量混合标准溶液或难易混化合物标准溶液，采集数据后对比，完全重叠则判定同一物质，否则为干扰峰；

5. 根据以上判定方式为阳性样品，建议使用 Agilent 6460、Ultivo、6470 或 6495 LC/MS/MS 进行最终确认。

注意事项

如果分离度小于 1.0，建议正式进样前，以 0.5 mL/min 的流速运行该方法梯度洗脱至少 10 次，然后变更为 0.2 mL/min 采集样品；

甲酸水溶液配制和使用时，尽量使用玻璃器皿，甲酸容易吸附在塑料制品（如移液枪枪头），从而导致甲酸水溶液浓度比例不准，分离下降。

有了这份“钢铁般直白”的梳理和翻译，新方法是不是容易理解了很多呢，有没有感受到满满的甜蜜。关于新方法，您还有什么想说的、想问的、想吐槽的，都可以在下方留言告诉我们，我们也将及时为您解答。