食品中米酵菌酸的测定方案

实验室条件

1.参考标准：

《 食品安全国家标准 食品中米酵菌酸的测定》（GB 5009.189-2016）

2.方法原理：

样品经过提取、净化、浓缩及过滤后，利用反相高效液相色谱分离，并根据保留时间定性，峰面积外标法定量。

3.仪器设备：

3.1高效液相色谱仪：福立LC5090高效液相色谱仪，配备有脱气机、二元高压输液泵、自动进样器、柱温箱及紫外检测器；

3.2天平：感量为0.0001g；

3.3平行浓缩仪：LabTech MultiVap-8；

3.4固相萃取仪；

3.5超声机；

3.6涡旋振荡器；

3.7实验室常用玻璃器皿。

4.试剂及标准品：

4.1甲醇：色谱纯；

4.2冰醋酸：分析纯；

4.3甲酸：分析纯；

4.4 氨水：分析纯；

4.5水：纯净水；

4.6 米酵菌酸标准储备液：100μg/mL。

4.7甲醇-氨水溶液：量取80mL甲醇，加入1.0mL氨水，加水定容至100mL，混匀。

4.8甲酸-甲醇溶液：吸取2.0mL甲酸于100mL容量瓶中，用甲醇稀释定容至刻度。

谱图及数据结果

1.标准溶液配制：

分别取米酵菌酸标准储备液（100μg/mL)3、5、10、20、50、100、200、400μL，以甲醇定容至1mL摇匀，待测。得到浓度依次为0.3、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0μg/mL的系列标准溶液。

1.1标准溶液典型谱图及数据结果

1.2重复性谱图及分析结果

米酵菌酸标准浓度10.0μg/mL的7针（进样量20μL）重复性谱图及结果如下：

1.3标准曲线

0.3、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、40.0μg/mL的系列标准溶液（进样量20μL）所得标准曲线：

1.4检出限

米酵菌酸标准浓度0.3μg/mL的7针（进样量20μL）重复性谱图及结果如下：

本方法检出限如下：

2.试样溶液配制：

干试样经粉碎过Φ0.425mm筛后，称取10g（精确至0.01g）置于锥形瓶中，加入50mL甲醇-氨水溶液，混匀，室温下避光浸泡1h，置于超声机中超声约30min，过滤，取滤液25mL置于平行浓缩仪中以80℃浓缩至约3mL，然后将试样全部转移至已活化好的固相萃取柱中，依次用5mL水和5mL甲醇淋洗，弃去流出液，抽干萃取柱，再用6mL甲酸-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，于平行浓缩仪中以40℃±0.5℃吹干，然后加入1mL甲醇，涡旋溶解，摇匀，过滤后进行HPLC分析。

2.1干银耳样品2针分析谱图及计算结果

样品中米酵菌酸未检出

2.2干银耳样品加标3针分析谱图及计算结果

样品分析结果如下所示：