只要1.5分钟！蛋白质的超快速分析！

使用HPLC模式分析蛋白质、多肽、核酸等生物样品，是生物、医药领域研究非常重要的一环。特别是样品多的时候，如何正确、快速的分析非常考验色谱柱的性能。

生物样品大多带有电荷，使用离子交换模式分析是常用的手段。而且，调整流动相的pH值或者盐浓度可以利用梯度法改变样品的保留时间，达到高分离能力的效果。

阳离子交换色谱柱IEC SP-FT 4A是使用无孔填料的快速分析色谱柱IEC SP-420N的改良版，能达到更快速的分离效果。在保持尖锐峰型的同时，分析时间由原先的3分钟可以缩短成1分钟。

SP-FT 4A规格

色谱柱尺寸4.6mm I.D.×10mm填料材质聚羟基甲基丙烯酸酯粒径2.7μm键合相磺基丙基离子交换容量0.2meq/g

实验结果：基本性能

1标准蛋白质的分离

IEC SP-FT 4A和原先的快速分析色谱柱IEC SP-420N使用MES作为流动相，可以进行标准蛋白质的分析。IEC SP-FT 4A分析时间更短，在1.5分钟内就能分析5种标准蛋白质。

2色谱柱压力

下图是IEC SP-FT 4A色谱柱流速和压力的关系。由于采用粒径为2.7μm的微粒，可以有效控制压力的上升。所以即使使用3.0mL/min的高流速条件，也可以把压力控制在20MPa以内，使用常规的高效液相色谱仪器即能达到超快速分离的效果。

3分离性能和流速的关系（梯度时间一定）

下图是改变流速α-Chymotrypsinogen A和Ribonuclease A分离度的比较。随着流速的增加，分离性能改善，2.3mL/min以上流速时分离效果达到稳定。虽然提高流速能缩短分析时间，但也会造成峰响应的减弱，所以标准流速推荐使用2.0mL/min左右。

4分离性能和梯度转换时间的关系

下图是改变流动相梯度转换速度时α-Chymotrypsinogen A和Ribonuclease A分离度的比较。减缓转换速度分离性能提高。在本实验中，为了保证缩短分析时间的前提，梯度时间推荐控制在2~5分钟内为宜。

5载样量

下图是改变进样量时α-Chymotrypsinogen A和Ribonuclease A分离度的比较。进样量5μg（各2.5μg）时分离性能优秀，再增大进样量分离性能下降。此结果表明蛋白质的最大进样量为5μg。

结果：应用实例

1血红蛋白 A, F, S 和 C的超快速分析

2糖尿病诊断

使用IEC SP-FT 4A可以1分钟内分离出糖化血红蛋白。

结论

采用新开发的粒径2.7μm的聚羟基甲基丙烯酸酯均一粒子填充的阳离子交换色谱柱IEC SP-FT 4A，可以抑制色谱柱内样品扩散，在高流速条件下得到优秀的分离性能。和本公司以往产品相比，在保留高分离性能的同时，分析时间提升为原先的3分之1。在品质管理等样品量非常多的时候，SP-FT 4A的超快速分离性能可以大大发挥作用。而且，使用高均一度的微粒填充，即使使用3.0mL/min的高流速也能把分析压力控制在20MPa以内，不需要高压设备，使用普通设备即能达到超快速的分离效果。