2020-06-09 19:45:34, Waters 沃特世科技(上海)有限公司
上周小编为大家介绍了如何挑选合适的GPC色谱柱,今天小编继续为你介绍与之相关的常见问题及解决方法,助力大家无忧使用GPC色谱柱。
在介绍常见问题及解决方法之前,我们首先了解一下GPC数据处理原理:
1️⃣ 用已知分子量的标样标定出流出时间和分子量的关系;
2️⃣ 用标定好的时间和分子量的关系曲线,对未知样各个流出级份的时间(分子量)和强度进行统计计算,得到分子量分布曲线;
3️⃣ 选用窄分布标准样(多分散性PD<1.1);
4️⃣ 洗脱体积标示于峰高处;
5️⃣ 做出校准曲线: Log(M) = f (Ve)。
几个窄分布标样可以混合在一起,以快速地建立一条标准曲线,但是要注意:
■ 一个混合标样不要超过3个窄标,并且注意浓度;
■ 一个混合标样内的3个窄标间的分子量至少相差一个数量级,以获得良好的分离效果。
注: 如果未知物与标准物不是同一类高聚物,则分子量仅仅是相对分子量。
在了解了GPC数据处理原理之后,我们就来看看GPC色谱柱的常见问题及解决方法。
校正曲线注意事项
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曲线拟合形状通常选择五次方拟合。近几年的研究表明,对校正GPC柱来说,这种拟合方式被认为是较好的,因为它最接近柱子的实际情况,标曲点数少于10个可以选择三次方拟合。
注意❗:五次方拟合会发生和一次方及二次方拟合一样的问题,即曲线两端以外的点没有保证。
聚合物样品制备注意事项
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聚合物溶液越稀越好,这样可以防止粘度效应和保留时间不重现的现象。稀溶液可以允许聚合物充分展开,进入最松弛的构造,无链纠缠,不形成微胶。进样体积:小于100 μL/每根色谱柱(7.8 mm ID)。
建议的样品浓度:
溶剂使用注意事项
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做GPC的流动相要尽量使用色谱纯试剂,其他能过滤的溶剂或液体尽可能过滤;在有柱子的时候尽量不要把气泡带进。
■ 使用THF(四氢呋喃)时:
需要注意溶剂中水含量及过氧化物的含量。水和过氧化物含量过高,会降低色谱柱寿命和结果的重现性。新购买的THF通常含有稳定剂(抗氧剂),这种THF经过滤即可使用。抗氧剂的存在可以抑制THF中过氧化物的可能生成,从而减少过氧化物对系统的可能侵害,延长密封垫寿命。
■ 使用DMF时:
有时需要添加50 mM的LiBr以消除电荷效应,并且要严格除水。
■ 使用氯仿体系时:
由于氯离子对管路有腐蚀作用,因此需要将管路钝化。
■ 水相GPC体系:
盐也可以用于水相GPC,因为色谱柱中的甲基丙烯酸凝胶带有负电荷。由于填料带有负电荷会与阴离子样品发生离子排斥,与阳离子样品发生离子吸附。使用硝酸钠盐,可以大幅度减小这些影响,以及当与阳离子样品发生任何离子交换作用时减少对洗脱液pH值的调整。
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