GMP 生产中生物负荷控制之填料篇

生物负荷 （Bioburden） 是 GMP 环境下进行药品生产的首要进行控制的风险，在生产过程中因为污染带来的潜在影响和成本是很惊人的，见（表 1）。

表 1 生物制药中生物污染造成的潜在影响和成本

图 1 生产中生物负荷的来源

GE 的 uppsala site 是唯一生产 GE 填料的场地，在生产环境我们努力做好以下控制：

• 控制环境中颗粒和微生物

• 改良织物，减少纤维的释放

• 在 ISO Class 8 级厂房中生产

基于完善的质量保证和追踪体系，我们分析了填料在 2010-2016 年间的生物负荷水平。以 Mabselect Sure™ 填料为例，超过 94% 的批次没有检测到生物负荷（图 2）。自 2017 年开始，琼脂糖填料生物负荷标准从 100 CFU/ml 降低至 20 CFU/ml，内毒素控制标准为<5 EU/ml。相关的变更控制通知（CCN）已经发送给注册的客户。

图 2 2010-2016.5 期间生产的 MabSelect Sure 填料批次生物负荷追踪

0.5-1M NaOH 是生产中常用的清洗试剂，能够有效去除填料上的蛋白污染、微生物，并且有数据证明对于病毒的灭活，细菌微生物的消毒及热源的去除等效果非常好。因此填料耐碱性是保证清洗程序有效的必要特性。

GE 的新一代 Protein A 亲和填料 MabSelect PrismA 在 40℃ 0.5M NaOH 中 8 h 接触，动态载量无明显变化，相比 Mabselect Sure LX 具有更强的耐碱性。

图 3 两种不同填料经过 0.5M NaOH（40℃）不同处理时间后的动态载量变化. 注：以人 IgG 为样品进行 DBC 测定；X 轴表示静态吸附时间，Y 轴表示静态吸附的相对载量

对于芽孢杆菌等，1M NaOH 的苛刻条件也不能实现有效控制的情况，GE 开发了新的消毒方法。采用 30 mM 过氧乙酸（PAA）处理 30 min 进行消毒，能够实现芽孢的灭活（见图 4）；经过 11 个循环，载量及抗体收率保持不变，填料展现出对 PAA 的良好耐受性（见图 5）。

图 4 多种试剂去除 B. 枯草芽孢的效果比较

图 5 在 30 mM PAA（30 min）CIP 条件下填料的动态结合载量及抗体收率变化

相较于传统的不锈钢技术，一次性方案能够降低交叉污染的风险，同时缩短清洗消毒所需的时间，降低批次间及共线产品间的周转时间。GE 前瞻性的推出了 RTP 预装柱，具有即到即用，预验证，预消毒验证的优点，因此深受生物制药研发企业青睐。

RTP 层析柱通过以下措施对生物负荷进行全程控制：

• 装柱：在 ISO Class8 级别厂房内进行装柱；

• 预消毒：柱子装填后进行 0.5M NaOH，40% 异丙醇处理 2 h；

• 检验：柱子需达到内毒素<0.25 EU/ml 和微生物<10 CFU/ml 的检测指标；

• 储存和运输：柱子保存在 20% 乙醇中，在经过验证的条件下进行运输。

GE 提供从 1L-32L 规格的 RTP 柱子，覆盖小试研究，临床前中试阶段，及临床样品制备至生产规模的需求。RTP 柱子帮助降低生物负荷风险的同时，缩短了生产时间，加速临床样品的制备，增加产能，助力企业药品快速推向市场。

图 6 不同规模的 RTP 层析柱

安全供货的三大基石之一就是有效沟通，我们通过简单的注册，邮件自动发送 CCN 通知，这些形式能很快的将变更及最新的填料信息达到客户端，可以作为生产的备案，SOP 建立的基础，验证的参考。客户根据我们详细的填料稳定性研究数据，可以设计针对性的清洗消毒程序，知悉填料生物负荷控制水平，对操作人员进行培训等，从各个环节降低生物负荷引入的风险。

GE 鼓励客户进行填料现场审计，了解填料生产的实际运行，帮助供应商不断进行质量改进。

图 7 安全供货、法规支持文件及变更控制控制