【酶标仪应用】核酸及蛋白质检测方法总述-1

使用SpectraMax酶标仪和Quant-iT PicoGreen荧光试剂测定双链DNA

最经典的双链DNA定量方法是通过酶标仪测定其溶液在260nm波长处的光吸收值。但此方法在借助传统酶标仪的光吸收检测法时，其最低检测线最低仅250 ng/mL，低于这个浓度的DNA溶液使用酶标仪的光吸收法则进行准确定量。一些生物学应用过程获得样品量较低，例如对用于克隆目的纯化的DNA片段和DNA扩增产物进行定量时，所以我们需要更佳灵敏的检测方法。Molecular Probes公司推出的Quant-iT PicoGreen 双链DNA定量检测试剂能特异性结合双链DNA，最大优势在于其检测灵敏度比传统光吸收法定量结果高出1000倍，此检测方法如借助于传统微孔板作为载体的情况下，动态学检测范围可从250pg/mL 到1000 ng/mL。

本应用文章中使用SpectraMax 荧光型酶标仪和Quant-iT PicoGreen试剂能够可靠的检测出低至100 pg/mL浓度的双链DNA。

使用具有紫外光吸收功能的SpectraMax酶标仪测定DNA和RNA含量

Molecular Devices退出了世界上第一台波长范围可至紫外光区的酶标仪，此后使用具有紫外光吸收功能的酶标仪进行DNA，RNA和蛋白质快速定量越来越流行。然而，相比传统的比色皿分光光度计，酶标仪想要获得准确的检测值 需选用合适材质的微孔板以及需要掌握更多专利技术，尤其在紫外光区进行检测时。缺少对这些细节的掌握很可能导致实验的失败。微孔板光吸收检测结果因光路路径长度而异，且易受空气/液体接触面的表面张力影响。目前的新型酶标仪，其光束口径较传统酶标仪更窄，更易因颗粒物干扰获得假信号。光路径中的颗粒物质在一次读数中可能导致光吸收检测结果上升至0.3 OD。因此特比指出样品溶液中一定要移除颗粒物质。以上这些因素都需要考虑严谨以便获得准确和重复性好的检测结果。

此文章中，我们提供了在SpectraMax酶标仪上测定DNA、RNA光吸收值的具体设置方法。

使用CyQUANT细胞增殖试剂盒测定细胞增殖情况

使用荧光法对细胞增殖情况分析可帮助研究人员容易地监测药物或其他处理对细胞的影响。来自Life Technologies公司的CyQUANT 细胞增殖分析试剂盒在借助于具有荧光检测功能的酶标仪时可以对细胞生长情况进行方便、快速、灵敏的分析。CyQUANT GR染料能与细胞中核酸特异性的结合，通过标准曲线可以计算出细胞数量。细胞中DNA/RNA含量比值在细胞周期的不同阶段会发生变化。因此为了获得准确的细胞数目，CyQUANT试剂盒中提供了含RNA降解酶细胞裂解液和核酸荧光标准曲线。

这里我们以CyQUANT试剂盒在SpectraMax酶标仪和SoftMax Pro软件上的应用进行举例。两种方法具体如下：首先，使用基于细胞的荧光标准曲线定量细胞增殖；然后，再用RNA降解酶处理过的细胞样品和DNA荧光标准曲线进一步定量细胞增殖。

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