色谱那些事（第二期）：色谱柱对液相系统的要求

上期回顾：硅胶基质和聚合物基质色谱柱的保存

本期内容：色谱柱对液相系统的要求

不同规格色谱柱的平衡时间

一般色谱柱的平衡时间取决于色谱柱的尺寸，通常在进入10-20倍柱体积，基线达到平稳后，柱子可达到平衡。 在下表总结了不同尺寸的色谱柱的平衡时间。

规格

柱体积（ml）

流速（ml/min）

平衡时间（min）

250*4.6mm

2.91

1.0

58

150*4.6mm

1.74

1.0

35

100*4.6mm

1.16

1.0

23

50*4.6mm

0.58

1.0

12

250*4.0mm

2.20

1.0

44

125*4.0mm

1.10

1.0

22

250*2.0mm

0.55

0.25

44

150*2.0mm

0.33

0.25

26

50*2.0mm

0.11

0.25

9

色谱柱对流动相 pH 的耐受性

一般的硅胶基质的 HPLC 色谱柱在 pH 2-8 内是稳定的。随着科技的发展，现在也有些改性色谱柱pH耐受范围也变得更加宽（例如：KNAUER Eurospher II C18H 和C18P 两款色谱柱 pH 耐受范围：1-12）。

超纯硅胶的固定相也可以在 pH 高达11条件下使用（KNAUER Eurospher II采用第三代超纯球形硅胶），也取决于流动相pH调节剂的化学性质。比如弱碱（例如氨类），部分强碱（例如四氢吡咯）不会侵蚀硅胶的表面，因此可以作为流动相pH调节剂。不建议使用强碱。

正相柱的使用范围

正相柱不仅可以在正相系统中使用，而且部分正相色谱柱也可以在反相系统中使用，比如氨基柱（正相色谱柱中最灵活的色谱柱），它可应用于正相、反相、离子交换（弱阴离子交换柱）中，在反相色谱柱中主要用于碳水化合物的分析；氰基色谱柱也可用于正相和反相（碳水化合物、甾体、极性化合物）分析。

注意：氨基柱正相模式转反相模式时，请使用异丙醇小流速过夜冲洗色谱柱。流速建议 0.1mL/min, 之后再转换到 100% 乙腈冲洗 20 柱体积，然后转换到和流动相相同比例的不含盐的乙腈水体系（水相不超过 40%）冲洗 20 柱体积。

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