熟肉制品中3种合成色素检测

到2006年为止，我国批准使用的合成色素有21种，其中最常用的有胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄和亮蓝等，均为水溶性色素。使用范围限于饮料、配制酒、糖果、糕点和青梅等，禁止用于肉类、鱼类、水果及其制品（红肠肠衣除外）。然后肉禽食品中却常检测出食用合成色素。目前国家标准方法GB/T 5009.35-2003中食品中人工着色剂用聚酰胺吸附法，制成水溶液，注入高效液相色谱仪测定其含量。然而对于熟肉制品，丙酮/水（9:1）提取效率较差，回收率较低。

本文在优化提取溶剂后，选用EXTRA全自动固相萃取仪，免人工干预，自动完成SPE 柱活化、样品上样、目标物洗脱和收集等步骤，释放了大量实验室劳力。收集液再经氮吹浓缩、溶剂转换定容后，以高效液相色谱仪（HPLC-DAD）完成了肉制品中胭脂红、苋菜红、诱惑红三种色素含量的测定。

仪器及器材

全自动固相萃取仪EXTRA（屹尧科技）、安捷伦1100高效液相色谱仪、二极管阵列检测器、超声波清洗仪、电子天平、超纯水机、高速离心机、氮吹仪、移液枪、C18色谱柱（4.6X250mm,5um）、 聚酰胺小柱 （500mg/3mL）

实验方法

1提取

称取2g（精确到0.01g）经绞碎的样品于50mL离心管中，加入20mL乙醇/氨水/水（89:1:10）溶液，超声提取10min，6000r/min离心3min，收集上清液，再向残渣中加入10mL提取液，重复提取直至提取液无明显颜色，合并上清液。将上清液在80℃下氮吹至2.5mL左右，再用20%柠檬酸溶液调pH值到6。

2净化

5mL水活化 >上样 >6mL甲醇/甲酸（6:4）淋洗 >8mL水淋洗 >9mL乙醇/氨水/水（7:2:1）洗脱

3分析

洗脱液在80℃下氮吹至干，用水定容至2mL，经0.45um滤膜过滤后用HPLC分析。

结果与讨论

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样品前处理方法的优化

GB/T 5009.35-2003标准中并没有提及熟肉样品的处理方法，通常用丙酮/水(9:1)溶液进行提取，但是实验过程中发现用此种提取液提取多次后，熟肉制品中仍有明显颜色，而且回收率较低，因而本文对提取溶剂进行了优化，选用乙醇/氨水/水（89:1:10）溶液作为提取溶液。提取优化后图片如下：

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色谱图

通过高效液相色谱分离，利用DAD检测器检测，在2.4.2色谱条件下，标准溶液、加标样品和空白样品的色谱图如下所示：

由图中可以看出，三种人工合成色素保留时间重现性良好，样品经净化后无明显干扰。

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标准曲线回归方程

将混合标准系列溶液在2.4.2色谱条件下进样分析，以混合系列标准溶液浓度为横坐标（Area），以相应峰面积为纵坐标（Amt）进行线性回归。回归方程及相关系数如下表所示：

结论

本实验采用全自动固相萃取仪结合高效液相色谱法同时检测熟肉制品中的三种人工合成色素：苋菜红、胭脂红、诱惑红。该方法抗干扰性强，具在、有较高的灵敏度，回收率符合要求，精密度RSD值也都较小。因此本方法能同时检测熟肉制品中3种合成色素，对市售熟肉制品起到很好的筛查作用。