智领前沿｜从肿瘤组织到回输制剂：西班牙TIL生产实践带来的自动化启示

TIL是从患者肿瘤组织中分离获得的淋巴细胞。由于这些细胞曾经进入肿瘤微环境，其中可能包含能够识别肿瘤抗原的T细胞群体。

与针对单一靶点的治疗方式相比，TIL细胞具有多克隆、潜在多靶点识别的特点，有望覆盖具有不同抗原表型的肿瘤细胞，降低因肿瘤异质性和抗原逃逸带来的影响。因此，TIL疗法在黑色素瘤及其他实体瘤治疗研究中受到持续关注。

但与此同时，TIL并不是一种容易实现标准化生产的细胞产品。

它的起始物料来自患者自身的肿瘤组织，不同患者的组织大小、细胞组成、淋巴细胞浸润程度和生长状态均存在明显差异。这种天然的个体差异，会贯穿后续分离、培养、扩增及质量控制全过程，也使TIL制备比常规细胞扩增面临更多不确定性。

虽然不同企业和研究机构采用的TIL生产工艺有所差异，但整体通常可分为两个主要阶段。

第一个阶段是预扩增阶段，即Pre-REP。

首先从患者实体瘤中获取组织样本，将其切分成多个组织小块，随后置于含有高浓度IL-2的培养环境中，使肿瘤组织中的淋巴细胞逐步迁出并扩增。获得初步扩增的TIL细胞后，需要开展相应的质量检测，合格后再进入下一阶段。

第二个阶段是快速扩增阶段，即REP。

这一阶段通常会加入滋养细胞、细胞因子及相应刺激条件，使TIL细胞在较短时间内扩增至满足临床使用要求的数量，随后完成收集、洗涤、浓缩和制剂化，用于患者回输。

据Jara介绍，经过多年工艺优化，部分TIL生产流程已由早期约三个月缩短至一个半月左右。但对于病情进展较快的肿瘤患者而言，这一周期仍然较长。如何进一步缩短制备时间、减少人工操作并提升批次稳定性，已经成为TIL工艺持续优化的重要方向。

TIL制备之所以难以标准化，并不是因为某一个单独步骤特别复杂，而是因为它从一开始就面对高度个体化的患者样本，并且在后续培养和扩增过程中，持续依赖人工判断、经验操作和大规模细胞处理能力。从VHIO的生产实践来看，TIL制备过程中的自动化优化，尤其集中在以下三个环节。

TIL制备的起始物料来自患者自身肿瘤组织，而不同患者获得的组织样本大小、细胞组成、T细胞浸润程度和生长潜力都存在明显差异。如果样本较小，或其中可扩增的T细胞数量有限，后续培养难度便会相应增加。

在传统操作中，工作人员通常需要手动将肿瘤组织切割成小块，再分别转移至不同培养容器中。这一过程不仅操作繁琐，也可能带来开放操作、人员差异和过程一致性等方面的挑战。未来，如果能够通过自动化、封闭式系统完成组织切分、分配和转移，将有助于减少人工干预，提高操作一致性，并降低污染风险。

进入Pre-REP阶段后，操作人员需要持续观察不同组织块中T细胞的迁出和扩增情况，并判断何时进行转移或扩大培养。这是一个高度依赖经验的环节。

由于肿瘤组织在前期通常会被分割成多个组织碎块，而不同碎块中所含T细胞的起始数量和活性并不一致，因此各培养孔中T细胞的扩增速度也可能存在差异。什么时候适合转移、扩增到什么程度可以进入下一步，往往需要操作人员经过系统培训后进行判断。

对于经验不足的操作人员而言，可能出现T细胞生长状态识别不准确，或转移时机判断不当等问题。转移过早，可能导致最终细胞产量不足；转移过晚，则可能影响细胞状态，并延长整体生产周期。

因此，TIL生产中的自动化，不能仅仅停留在“把液体从一个容器转移到另一个容器”的层面，还需要逐步具备对细胞状态的“感知能力”。例如，通过自动换液减少重复性人工操作；通过在线成像持续采集细胞生长信息；再结合图像分析和人工智能，辅助判断细胞形态、密度及扩增状态，为传代和转移时机提供更加客观的依据。当设备不仅能够执行动作，还能够观察和辅助判断，TIL生产才有可能进一步降低对个人经验的依赖。

在REP快速扩增阶段，通常需要加入经过处理的外周血单个核细胞（PBMC）作为饲养细胞，为TIL细胞扩增提供支持。由于扩增规模较大，饲养细胞的需求量也十分庞大，这意味着生产团队需要在有限时间内完成大批量PBMC的分离、洗涤、浓缩及后续处理。

Jara在分享中提到，大规模PBMC制备曾是团队面临的突出难点。部分传统设备在处理量和操作效率方面难以匹配实际生产需求，工作人员需要投入较多时间进行多轮处理，也增加了生产组织和人员安排的压力。

在VHIO的实践中，赛桥Gentle Flex Pro凭借较大的单次处理能力，可支持大批量PBMC的分离、洗涤和浓缩，减少重复操作，更好地匹配TIL快速扩增阶段对饲养细胞的制备需求。经过多次实际应用，其处理结果能够满足团队的工艺要求，也显著减轻了工作人员在这一环节的操作负担。