AQbD液相方法开发：一篇搞懂核心步骤

01  传统的液相方法开发逐渐没落……

传统的液相方法开发是随机摸索，或者进行单因素的调节（梯度，有机相，pH，色谱柱等），以观察理论塔板数、保留时间，分离度，拖尾因子等，最后确认方法。

传统的液相方法开发思路：（蓝色属于方法开发板块）

0. 基于合成路线收集基本信息

1. 文献检索

2. 方法优化、开发

3. 确定样品制备和色谱参数

4. 方法开发最终确认

5. 预验证

6. 方法验证

7. 方法转移

   
   

这种策略有3个明显的缺点：

1. 耗时（摸索过程不系统，无法预估什么时候做完）
2. 忽略了几个因素之间的交互作用，比如梯度和温度有叠加效益
3. 方法耐受性差，转移容易出问题（因为不是最优解）

02 基于AQbD的液相方法开发悄然兴起……

ICH Q14历经草案发布、意见征集等多个阶段，于2023 年 11 月 1 日被 ICH 大会的监管成员国采纳，并在2024 年 6 月 14 日正式生效实施。对于分析方法开发向AQbD转变，提出了明确的要求。

比如：给出了方法全生命周期流程图，强调了ATP，风险评估等；

要考虑多因子交互的影响：鼓励药企运用实验设计（DOE）、多元设计等工具开展方法开发工作，从而促使了我们（药企）引入数字化和统计学工具软件来实现多因子系统分析技术研究；

提出了分析方法操作设计区域（Method Operable Design Region，MODR），在该区域内的参数变更无需监管机构重新批准。

药企要向监管机构提供方法开发过程，并证明确定的分析方法能否满足预期。

基于AQbD的液相方法开发思路：（蓝色属于方法开发板块）

0.  基于合成路线收集基本信息

针对上面的第2步，对关键质量参数CQA，如何进行风险评估：

第一列是质量属性（拖尾因子、理论塔板数、保留时间、分离度）；

第一行是实验条件（pH缓冲液、pH大小、流速、柱温、进样量、有机相、固定相、梯度时间、平衡时间）。

依据不同的方法，我们应该建立不同的风险评估表，针对关键质量属性，评估不同影响因素的影响（高中低）

03 ACD软件辅助的分析方法开发思路

以ACD为代表的方法开发软件的出现，大大推动了基于AQbD的液相方法开发的行业发展。

下面是基于ACD软件给大家总结的方法开发流程图（适用于初学者），大家可以以此为基准学起来。

1. 对已知结构的主成分和杂质进行logD预测，得到所有组分的pH-logD叠图，分析曲线图，初步风险评估（看正负，看大小：数值越大，理论疏水性越强，数值越负，表明亲水性越强，越难直接通过疏水作用在反相色谱柱保留）
2. 根据理论预测的pH-logD叠图结果，选一款能保留的柱子，然后进行流动相pH的筛选——这阶段关注峰型、峰数量和保留，首选关注主峰峰形态，选主峰峰对称度最好的pH，作为后续的起点
3. 基于上述pH，再筛选几款不同填料类型的色谱柱——这阶段关注峰型、峰数量和保留，首选关注峰数量，越多越好
4. 在选中pH和色谱柱后，采用DOE，开始优化梯度、温度甚至流动相混合比（两因素或者三因素实验）
5. 将条件实验的色谱结果导入ACD软件，进行两因素或者三因素建模，找到分离度大于1.5的橙色区域。
6. 通过ACD软件找出最佳条件后，再在色谱仪器上上机确认，与理论结果比对，是否成功。
7. 下一步，就是耐用性研究，利用统计学软件确定MODR（本节内容下次分享。）

本节总结内容参考了嘉诺康的《基于AQbD的HPLC分析方法开发以及案例分享》，推荐爱学习的小伙伴也去学习原文。

链接如下：基于AQbD的HPLC分析方法开发以及案例分享

本篇文章属于小编自学后的精简版学习手记，希望能帮大家快速入门。