全球首个耳聋基因疗法获批，AAV 如何靠碘克沙醇超速离心提纯？

2026 年 4 月，FDA 加速批准了再生元公司开发的 OTOF 相关耳聋基因疗法  Otarmeni 用于治疗因 OTOF 双等位基因致病变异导致的重度至极重度感觉神经性耳聋，是全球首个针对该适应症的 AAV 载体体内基因疗法。

AAV 以相对安全、可长期表达和良好组织靶向等特点，已成为体内基因治疗的主流载体，广泛应用于眼科、神经、肌肉和代谢性疾病等多种适应证的研发。

要让这类疗法真正安全可控，关键在于下游工艺既要高效去除细胞碎片、宿主蛋白等杂质，又要尽可能分离空衣壳与装载完整基因组的实心衣壳，这已成为 AAV 工艺开发的核心难点之一。

围绕上述需求， Eppendorf 最新发布的应用文献展示了如何利用  CP100NX 超速离心机搭配 P70AT 固定角转（40PP 离心管）实现功能性 AAV 颗粒的高效分离与纯化。

在 DASbox^® 迷你生物反应器系统（搭载 BioBLU^® 0.3c 一次性罐体）悬浮培养 HEK293 细胞，后续进行三质粒共转染以制备携带 CMV EmGFP 的重组 AAV；37 ℃ 培养 72h 后，通过实时定量 PCR 测得体系中载体基因组滴度约 2.3×10⁹ vg/mL，为后续超速离心提供了稳定、可放大的进料来源。

▲ 在 BioBLU^® 生物反应器中完成转染后的完整工作流程

澄清后的粗制 AAV 裂解液被装载入 40PP 超速离心管中（含 15%、25%、40%、60% 四层不连续碘克沙醇梯度），使用 CP100NX 超速离心+P70AT 转子，350,000 × g，10 ℃，离心 90 min 纯化 AAV。

▲ 转染与后续分离分析所用全部 Eppendorf 设备