Adv Sci | 福建医科大学附属第一医院王丽虹、姜伟，浙江中医药大学丁志山：三叶青多糖抗三阴性乳腺癌恶性进展的机制研究

三阴性乳腺癌（TNBC）是乳腺癌中侵袭性最强、预后最差的亚型，且缺乏有效的靶向治疗手段。肿瘤细胞在快速增殖和转移过程中，内质网蛋白折叠负担显著增加，导致未折叠蛋白积累，持续激活未折叠蛋白反应。这种慢性内质网应激反而成为TNBC赖以生存的“成瘾”机制，帮助细胞适应应激环境并维持恶性表型。蛋白质二硫键异构酶A4（PDIA4）是内质网中关键的分子伴侣和氧化还原酶，在多种肿瘤中高表达，促进肿瘤细胞应激适应和转移。然而，PDIA4的转录调控机制及其作为治疗靶点的潜力尚不明确。另一方面，Hippo信号通路的效应因子YAP/TEAD4转录复合物在TNBC中异常激活，驱动促转移基因表达。天然产物长期以来是抗肿瘤药物的重要来源。三叶青作为一种传统中药，其多糖成分（THP）显示出抗炎、抗氧化及初步的抗肿瘤活性，但THP是否通过调控内质网应激适应机制抑制TNBC转移，以及其具体分子机制，仍需系统研究。

由福建医科大学附属第一医院王丽虹、姜伟研究员与浙江中医药大学丁志山教授团队发现THP通过破坏Hippo-YAP/TEAD4-PDIA4轴，瓦解TNBC细胞对内质网应激的“成瘾”依赖，从而显著抑制肿瘤转移。该研究首先通过化学表征明确了THP的组成与纯度，并在体外实验中证实THP在非细胞毒性浓度下即可有效抑制TNBC细胞的迁移、侵袭、血管生成及胞内钙离子水平。机制研究证明，THP能够激活Hippo激酶级联（MST1-LATS1），促使YAP磷酸化、胞质滞留并降解，同时下调TEAD4蛋白表达，从而阻断YAP/TEAD4复合物对PDIA4启动子的直接转录激活。PDIA4的下调导致内质网蛋白稳态崩溃，诱导不可逆的致死性内质网应激，并干扰PDIA4介导的钙信号与代谢重编程。在动物模型中，THP能够安全、有效地抑制TNBC小鼠模型的肺转移；患者来源的类器官及斑马鱼异种移植模型也进一步验证了上述抗转移效果。该研究确立了Hippo-YAP/TEAD4-PDIA4轴作为TNBC的可干预靶点，并将THP定义为靶向该轴的首类天然多糖候选药物。

图1. THP对TNBC细胞Hippo信号通路、TEAD4表达及细胞功能的调控作用。(A) GSEA分析结果显示THP处理的细胞Hippo信号通路显著上调。(B) 热图展示THP处理后差异表达基因的变化。(C) 不同浓度 THP干预TNBC 细胞后Hippo通路的蛋白表达水平。(D) TEAD4在泛癌组织中的表达谱。(E) TEAD4 表达水平对TNBC患者预后生存期的影响。(F-J) TEAD4过表达/敲低对TNBC细胞迁移、侵袭能力的调控作用。(K,L) TEAD4过表达/敲低后TNBC细胞内总钙离子水平变化。(M) 不同浓度 THP处理TNBC细胞后TEAD4 蛋白的表达

图2. THP抑制TNBC细胞蛋白质加工并调控内质网应激。(A) GSEA显示THP处理的细胞内质网蛋白质加工通路显著下调。(B-C) TNBC细胞经 THP 处理后的差异表达基因以及对应的蛋白分类。(D) THP 处理后下调最显著的前十位基因。(E) 不同浓度 THP处理后TNBC细胞中PDIA4、Bip蛋白的表达水平。(F-G) ChIP 实验验证THP处理前后TEAD4与PDIA4 存在相互作用。(H-I) 双荧光素酶报告基因实验证实 TEAD4 正向调控 PDIA4的表达。(J) TCGA 数据库结果显示PDIA4 与 TEAD4 的表达呈正相关。(K) TNBC细胞内质网电镜图。(L) 不同浓度 THP处理后，TNBC细胞中内质网应激通路蛋白及促凋亡蛋白的表达水平

图3. THP在体内抑制TNBC转移。(A) 4T1-luc细胞荷瘤小鼠模型的实验设计示意图。(B) 小鼠体内生物发光成像显示肿瘤转移情况。(C) 不同处理条件下，肿瘤平均生物发光通量随时间变化的定量分析。(D) Kaplan–Meier生存分析展示各组小鼠的预后生存情况。(E) 动态监测各实验组小鼠体重变化。(F) 肺转移病灶组织切片中TEAD4、PDIA4 免疫组化染色代表图片

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