微纯科技PrePulite® Indsil 7μm制备填料：兼顾分离效率与制备压力的创新解决方案, 大幅降低纯化成本

目前，在工业化制备色谱领域，为避免运行压力过高，市面上常规使用10-20μm的硅球作为制备色谱填料。色谱柱背压与填料粒径的平方成反比，粒径越小柱压越大，而工业化制备通常需要高流速和大通量，系统耐压能力相对有限，导致小粒径填料难以直接应用于生产规模。此外，小粒径填料装柱难度大，填料成本更高。

然而，生物类医药由于合成条件复杂，杂质种类极其繁多，例如多肽类药物易产生氧化、差向异构等杂质，另外还会生成降解杂质。核酸类药物中常含有序列延长或截短、碱基错位、脱保护不完全等杂质；重组蛋白类药物常面临脱酰胺、氧化、聚集、片段化及异构化等稳定性问题。与此同时，该类药物的目标产物多为具有特定生物活性的多肽链、寡核苷酸链或重组蛋白，其纯度和结构完整性直接决定药效与安全性，产品质量要求极为严苛，通常需控制单一杂质含量在0.1%以下。这对分离制备提出了严峻挑战。

面对生物类医药复杂杂质与严苛纯度要求的双重挑战，传统10-20μm制备填料在分离效能方面逐渐显现不足。为攻克这一难题，在兼顾制备压力的前提下提升分离效果，国内领先的色谱填料供应商微纯科技特别推出了PrePulite^® Indsil C18/C8和Indxp C18/C8两个系列7μm制备色谱填料。

基于色谱理论计算，仅粒径不同的填料，7μm比10μm填料分离效果可提升约19%。这一粒径规格有效平衡了分离效率与制备背压，为多肽、核酸、重组蛋白等高难度药物杂质的工业化分离制备提供了全新选择。

以PrePulite^® Indsil C8 7μm填料为例，以3cm/min线速度（50mm DAC对应流速为58mL/min、300mm DAC对应流速为2.1L/min）制备，柱压~3.5MPa，目前主流DAC耐压均在7MPa以上，泵系统耐压均在10MPa以上。

检测方法：

波长：214nm

柱温：60℃

流动相：A相：0.1%TFA；B相：0.1%TFA乙腈

色谱柱：Phenomenex XB-C18 100Å Aeris Peptide(core-shell),2.6μm，4.6*250mm

梯度：

实验方案：采用两步制备法，以得到色谱纯度≥99.00%，单杂≤0.20%的产品为标准进行对比。

对比填料：微纯制备填料PrePulite^® Indsil C8/Indsil C18 7μm、Indsil C8/Indsil C18 10μm、进口填料K牌-C8 10μm填料。

柱效测试方法：

流动相：ACN/Water=70/30

检测波长：UV 254

流速：0.80mL/min

样品：Acenaphthene

第二步制备主要参数：

载量：目标产物约0.9%（6g/L）

流动相：酸性流动相+乙腈

线速度：3cm/min

小结：

1.PrePulite^® Indsil 7μm填料在纯度、单杂和收率等方面明显优于其他三款10μm填料，尤其收率方面高出其他填料5%-8%。

2.就该样品的制备纯化效果而言，PrePulite^® Indsil系列7μm和10μm填料可完全替代进口填料，并给用户带来大幅度的降本增效。

主要参数：

载量：目标物约8g/L(1.2%)

流动相：酸性流动相+乙腈

线速度：3cm/min

结论：

对比PrePulite^® Indsil C8 10μm制备效果，就目标物出峰时间而言无明显区别。制备馏分检测结果表明7μm色谱柱对该批次样品制备效果较好，一次制备可将纯度达到98.0%以上。就难制备RRT 0.98min杂质而言，7μm色谱柱可控制在0.50%以内（一次制备要求）。

纯化条件：

填料：PrePulite^® Indxp-C8 7/10μm

线速度：3cm/min

载量：目标产物8g/L(1.2%)

柱压：10μm柱压力2.2MPa；7μm柱压力3.5MPa

图9：制备馏分检测对比

表4：制备馏分结果

结论：

观察制备谱图和馏分检测对比图，相比杂化系列PrePulite^® Indxp C8 7μm填料，PrePulite^® Indxp C8 10μm对该样品前杂和后杂的分离效果较为明显。

分析馏分结果统计表，杂化系列制备填料PrePulite^® Indxp C8 7μm制备效果在纯度、单杂、收率等方面明显优于10μm填料。