HS-D-5800P带您解码Oligo制备纯化

2026-05-18 17:40:34, 市场部飞诺美

从 siRNA、ASO 到 mRNA 相关功能序列，寡核苷酸（Oligo）正在成为创新药研发中的关键分子工具。但在研发推进过程中，真正决定筛选效率与结果可信度的，往往不是“能不能合成”，而是“能不能快速拿到足量、高纯度、可重复的样品”。对研发团队而言，一套兼顾分离效率、方法灵活性、收集准确性与高通量排样能力的制备平台，已经成为 Oligo 纯化环节的重要支撑。

为什么 Oligo 纯化

更需要高压制备平台？

Oligo 极性强、保留相对较弱，对进样方式、延迟体积、收集切换以及方法重现性都有更高要求。

在候选序列筛选阶段，既要追求高通量，又要兼顾mg级样品制备，以支撑体外机制研究、细胞实验乃至早期体内评估。

因此，研发阶段不仅需要“能分开”，更需要“稳定分、快速分、批量分、精准收”。

HS-D-5800P：

为 Oligo 纯化打造的高压制备解决方案

HS-D-5800P 制备型高压液相色谱系统具备 0–40 MPa 系统耐压、1–150 mL/min 流速范围，标配 UV-VIS 200–800 nm 双波长检测器，并可选配 ELSD。系统采用分体式自动进样器与分体式二维馏分收集器设计，支持多规格样品管与试管架配置，同时可扩展 5 mL 至 20 mL 定量环，兼顾方法开发、小试放大与高通量制备。

1. 更高耐压，支持更小粒径制备柱和柱串联，释放 Oligo 方法开发空间

2. 双波长监测 + 灵活收集，让目标峰判断更从容

3. 面向高通量的排样与重复进样能力

4. 独立进样与独立收集，减少流程干扰

5. 报告与过程回溯更清晰

应用实证：

HS-D-5800P 完成 20nt Oligo 纯化，

目标馏分纯度最高达 99.7%

本次应用中为 50 OD 的 20nt Oligo粗品，样品以 1 mL 水溶解后，经 0.22 μm 滤膜过滤。

粗品分析

色谱柱：Kinetex EVO C18, 2.6µm, 4.6×150mm

流动相A：水（400mM HFIP和16mMTEA）

流动相B：甲醇

检测器：260 nm

流速：1.0 mL/min

柱温：30℃

梯度：

制备条件采用 Kinetex EVO C18 5 μm 10×150 mm AXIA制备柱，流动相 A 为含 400 mM HFIP 与 16 mM TEA 的水相，流动相 B 为甲醇，流速 4 mL/min，检测波长设置为 260 nm（主检测）与 280 nm（监测），进样量 50 OD。

检测结果

主峰 34.5–37.0 min 区间收集后，检测纯度可达到 97%。

其中后段主峰 35.7–37.0 min 馏分，检测纯度可达到 99.7%。
HS-D-5800P 的序列排样搭配核壳类高柱效的制备柱，可用于 Oligo 样品的高纯度制备分离，为后续生物学评价提供可靠样品基础。

针对 Oligo 纯化的实用方法建议

重视样品过滤与流动相脱气

样品溶解后建议过滤，以降低颗粒污染、异常压力波动和峰形异常风险；HFIP/TEA 类流动相应充分脱气，并尽量减少与空气长期接触；若发现水相吸液端易夹带气泡或基线不稳，可结合系统情况优化吸液方式，并在检测器后端适当增加背压以提高信号稳定性。

关注延迟体积对收集窗口的影响

在 10 mm 半制备柱、较低流速等条件下，检测器至收集模块之间的延迟体积对应的延迟时间会更明显，但会准确绕让过延迟体积，精准收集目标峰。

推荐采用“三明治进样”优化上样表现

由于 Oligo 极性较大、保留相对较弱，建议关注样品溶剂与初始流动相的匹配。必要时可采用三明治进样（稀释进样）以改善峰形和进样重现性。若采用定量环满环进样，应保证总吸样体积充满定量环。例如 5 mL 定量环可采用：流动相 A 3000 μL + 样品 1000 μL + 流动相 A 1000 μL。

有机相选择要与离子对体系匹配

在HFIP添加浓度较高、且流动相处于富水或特定配比时，乙腈可能带来相分离/混浊风险，方法开发前应先验证流动相相容性；若体系稳定性不足，优先考虑使用甲醇作为有机相。对存在明显二级结构或分离难度较高的 Oligo 样品，可结合序列特点进一步考察柱温、离子对试剂浓度和梯度斜率，以提升分离度与方法稳定性。

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