强阳离子交换色谱柱助力抗体电荷异质体分析检测——Shim-pack Bio IEX SP-NP

电荷异质体

单克隆抗体

近年来，单克隆抗体（mAbs）用于治疗癌症、自身免疫性疾病、心血管疾病、呼吸系统疾病、血液病以及多种感染等严重和慢性疾病展现重要作用。由于其巨大的治疗价值和商业价值，在过去数年中一直位居十大最畅销药物之列，同时单克隆抗体也是获批最多的生物制药。

由于生产、加工或储存过程中的翻译后修饰（如糖基化、脱酰胺）或化学修饰（如氧化、异构化），导致分子净电荷改变。同时随着运输等的影响，也会出现不同的异质体。电荷异质体的检测分析方法通常包括：等电聚焦（isoelectric focusing,IEF）凝胶电泳、毛细管等电聚焦（Capillary isoelectric focusing,cIEF）、成像毛细管等电聚焦（Imaged capillary isoelectric focusing,icIEF）、阳离子交换色谱（Cation exchange chromatography,CEX）、阴离子交换色谱（Anion exchange chromatography,AEX）等。

多数单克隆抗体（mAb）等生物治疗药物的等电点（pI）在 7.0-9.0 之间，在中性偏酸的流动相环境（如 pH 5.0-6.5）中呈正电荷状态，能与阳离子交换色谱柱的固定相高效结合。而阴离子交换色谱需抗体带负，此时在高pH条件，抗体易发生结构不稳定、聚集等问题，影响分离准确性。

阳离子交换色谱（CEX）已成为表征单克隆抗体电荷异质性的标准方法。阳离子交换色谱（CEX）涉及两种主要机制，即盐梯度和pH梯度。在盐梯度洗脱中，单克隆抗体电荷变体通过与流动相中的盐离子竞争，从交换位点置换下来。在pH梯度洗脱中，单克隆抗体电荷当pH值达到变体几乎不带电或完全不带电的点时，变体就会从色谱柱中洗脱出来。电荷异质体分析最常用的方法仍然采用盐洗脱机制。重点关注方法的稳健性，色谱过程中pH值的控制对于保持保留时间稳定和方法稳健性至关重要。离子交换柱本身具有固有的缓冲能力，可在分析过程中控制pH值。

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