“光热混动”高效节能！NanoTemper攻克共价化合物互作检测难题

共价抑制剂作为攻克难成药靶点、克服临床耐药的核心利器，早已成为新药研发的热门方向，从布鲁顿氏酪氨酸激酶（BTK）抑制剂伊曲替尼、表皮生长因子受体（EGFR）抑制剂奥希替，多款重磅药物的成功，让共价药物研发成为行业焦点。

针对以上研究的全流程痛点，NanoTemper推出 “光热混动”双核模式，经典的MST（微量热泳动）与创新的SpS（光谱位移）技术，在效率和成本两个维度给出了完美解决方案，依托高分文献实证，轻松实现亲和力表征、慢动力学分析，适配各类靶点，样品消耗极低，彻底打破传统技术局限！

2026年1月自中国科学院分子细胞科学卓越创新中心、上海交通大学，赛岚医药的研究人员发表在Nature Chemical Biology的文章开发出胸腺嘧啶DNA糖基化酶（TDG）蛋白共价抑制剂，可在p53缺陷型癌症中诱导合成致死效应。

TDG在肿瘤中高表达，但在癌症进展中的作用机制以及靶向TDG的治疗应用仍不甚明确。在本研究中，作者发现抑制TDG可在p53缺陷的癌症中诱导合成致死效应（指两个基因中任一单独失活时细胞仍可存活，但两者同时失活则导致细胞死亡的现象）。

作者利用高通量药物筛选平台，筛选优化获得首个TDG共价抑制剂C-271，并解析了C-271通过靶向TDG活性位点附近的C276抑制其酶活。通过MST技术表征了C-271以高亲和力特异性结合TDG，而不与其他糖基化酶同系物结合。MST实验在溶液条件下进行，实验操作简单，进行一次亲和力检测，仅需极少量TDG蛋白（829ng) 。

图示：MST实验显示C-271与TDG的特异性结合

本研究首次揭示TDG与p53的合成致死关系，发现共价抑制剂C-271在p53缺陷肿瘤中选择性诱导免疫原性细胞死亡，为p53突变癌症这一"不可成药"靶点开辟了新的治疗策略。

共价药物与靶标发生结合主要分为两个过程：

(1) 可逆结合：形成初始非共价复合物，第一步的potency以 K_I表征，K_I表示达到最大潜在共价键形成速率一半时所需的抑制剂浓度

(2) 共价键形成：不可逆反应步骤，以 K_inact 表征，描述共价键形成的最大潜在速率。

共价化合物并不能简单用IC₅₀来描述化合物对靶标的活性抑制。随着共价弹头活性以及非共价部分的亲和力改变，以及检测时间点、温度的变化，IC₅₀会有较大的波动，而K_inact / K_I能更好的表征共价化合物抑制效率^[2]。

基于光谱位移技术SpS的Dianthus α提供共价化合物慢动力学分析（Slow Kinetics ）。将梯度共价化合物和靶标蛋白混合后，置于Dianthus α仪器内，设定监控和间隔时间后，仪器自动完成检测，获得动力学曲线。

动力学监测（左图）：较高浓度（蓝色/青色）比低浓度（黄色/绿色）更快达到饱和。虚线表示用于提取 kobs 值的指数拟合。

计算k_inact / K_I（右图）：将kobs 与共价抑制剂浓度作图，非线性拟合得出 k_inact =3.73×10⁻³ s⁻¹，K_I=3.20×10⁻⁵ M，以及二阶速率常数k_inact / K_I=116.49 M⁻¹s⁻¹，符合两步共价结合机制的特征。

Dianthus α操作简单，仅需一份样品便可自动完成检测和计算，且适用于无酶活性的靶标蛋白表征。

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