单克隆抗体纯度分析：毛细管凝胶电泳法应用实例

治疗性单克隆抗体结构复杂、生产敏感性高，因此全面表征其理化性质是生物制药领域的重中之重。毛细管电泳技术为此提供了强大的分析工具，能够系统评估抗体的纯度、等电点、电荷异质性和糖基化等属性。同时，毛细管电泳技术还是现代单克隆抗体药物从研发到上市全过程质量控制的基石技术之一。特别是被全球各大药典（如USP， EP， ChP）收录的CE-SDS方法，在纯度分析上以其快速、高分辨、重现性好和自动化的特点，全面超越了传统的SDS-PAGE技术。

本研究利用AutoCE-3000全自动毛细管电泳系统对IgG1重组单克隆抗体样品的分子大小变异体进行分析，以测定产品纯度，并对重复性进行了详细考察。

3.1还原处理单抗

还原处理单抗的CE-SDS测试结果如下图1所示。

图1  AutoCE-3000系统上进行还原单抗CE-SDS纯度分析电泳图

连续进样 6 次进行重复性实验，叠加谱图结果见图 2，迁移时间RSD均在0.9%以内，峰面积RSD均在1.8%以内，重复性良好。

图2  AutoCE-3000系统上进行还原单抗CE-SDS纯度分析时连续六针的电泳叠加图(n=6)

对重复性测试中的轻链(LC)、非糖基化重链(NGHC)和重链(HC)的迁移时间及校正峰面积百分比的数据进行计算，结果如表1。迁移时间的RSD分别为0.82%，0.85%和0.81%；校正峰面积百分比的RSD值分别为0.32%，1.38%和0.16%。

表1  还原单抗的轻链、重链及非糖基化重链的迁移时间和校正峰面积百分比RSD值统计

3.2非还原处理单抗

非还原处理单抗的CE-SDS测试结果如下图3所示。

图3  AutoCE-3000系统上进行非还原单抗CE-SDS纯度分析电泳图

连续进样 6 次进行重复性实验，叠加谱图结果见图 4，迁移时间RSD在0.4%以内，峰面积RSD在1.7%以内，重复性良好。

图4  AutoCE-3000系统上进行非还原单抗CE-SDS纯度分析时连续六针的电泳叠加图(n=6)

对重复性测试中单抗主峰的迁移时间及校正峰面积百分比的数据进行计算，结果如表2。迁移时间的RSD为0.36%；校正峰面积百分比的RSD值为0.06%。

表2  非还原单抗主峰的迁移时间和校正峰面积百分比RSD值统计

采用通微Auto CE-3000全自动毛细管电泳系统搭配CE凝胶可以定量测定IgG1重组单克隆抗体产品的纯度，重复性良好，并满足 2025 版中国药典的要求。该方案可以更好地监控单抗药物的生产，优化生产工艺，保障药物安全，监控关键杂质，从而确保药物的安全性和有效性。