AutoCE-3000 全自动毛细管电泳仪分离检测饲料中的13种氨基酸

α-氨基酸不仅是组成蛋白质的基本单位，其代谢产物在生物体内也具有重要的生理功能。α-氨基酸也是食品、饲料等的检测指标之一。本实验参考了农业部标准《NY/T 3001-2016饲料中氨基酸的测定——毛细管电泳法》，采用柱前衍生法对待测样品进行衍生化，建立了区带毛细管电泳-紫外检测法实现了精氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸和甘氨酸共13种氨基酸的分离检测。本法如无特殊注明溶剂均为二次蒸馏水。

单一氨基酸标准储备液：分别称取精氨酸、赖氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、苏氨酸、丝氨酸、丙氨酸和甘氨酸各0.0200 g，分别置于10 mL离心管中，准确加入10 mL水溶解，分别得到浓度为2.0 mg/mL的13种氨基酸的单一氨基酸标准储备液。如有必要，可在水浴锅中缓慢加热至60~70 ℃充分溶解。苯丙氨酸和酪氨酸标准储备液可保存2个月，其他氨基酸标准储备液可保存4个月。

氨基酸混合标准溶液：准确移取13种单一氨基酸标准储备液各0.500 mL，混合，稀释定容到10 mL，得到每种氨基酸的浓度均为0.1 mg/mL的氨基酸混合标准溶液。混合标准溶液可保存2周。

衍生化样品：准确移取氨基酸混合标准溶液0.6 mL于5 mL离心管中，准确加入0.1 mol·L-1碳酸钠溶液0.9 mL，准确加入1.6 %（v/v）异硫氰酸苯酯（PITC）异丙酮溶液1.8 mL，振荡，盖上盖子，室温静置反应30 min，用氮吹仪吹干，用3.3 mL水溶解残留物，5000 r/min离心5 min，将上清液用0.22 μm滤膜过滤，得到氨基酸浓度为0.02 mg/mL的衍生化样品。

本实验参照国标条件，建立了区带毛细管电泳-紫外检测法，实现了分离检测精氨酸等13种氨基酸，方法可靠有效，快速方便，线性范围较宽，可以应用到日常检测当中。