奶及奶制品中雌三醇残留量的测定

2022-11-16 17:57:49 月旭科技（上海）股份有限公司

适用范围

本标准规定了奶及奶制品中雌三醇残留量的测定方法（本实验样品为牛奶）。

参考标准：《GB 29698-2013 食品安全国家标准奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、炔雌醇多残留的测定气相色谱-质谱法》

提取步骤

准确称取10g试样（精确至0.01g）于50 mL离心管中，加入5mL乙腈、15mL乙酸乙酯，涡旋3min，以8000r/min离心5min，吸取上清液于50mL鸡心瓶中，残渣重复上述步骤重复提取一次，合并提取液。于40℃下浓缩至近干，用1mol/L NaOH溶液6mL分三次溶解，转至另一50mL离心管中，加20mL正己烷涡旋振荡1min，以8000r/min离心3min，收集下层提取液，用5mol/L盐酸溶液调pH至5.0-5.2，备用。

净化步骤

SPE柱：月旭Welchrom® C18小柱，规格：500mg/6mL。

活化平衡：5mL甲醇，5mL水；

上样：将备用液全部上样，弃去；

淋洗：5mL水，弃去并压干；

洗脱：5mL甲醇，收集并压干。

收集洗脱液于40℃氮吹至干，用5mL 95%正己烷-乙酸乙酯溶液溶解残余物，待净化。

SPE柱：月旭Welchrom® Silica小柱，规格：500mg/6mL。

活化平衡：5mL正己烷；

上样：将待净化液全部上样，弃去；

淋洗：5mL正己烷，弃去并压干；

洗脱：5mL 70%正己烷-乙酸乙酯溶液，收集于具塞玻璃试管中并压干。

衍生化

将上述洗脱液于40℃氮吹至干，加入30μL七氟丁酸酐、70μL丙酮盖紧盖子，涡旋混合30s，于30℃恒温箱中衍生30min，氮吹至干，准确加入1mL正己烷，涡旋混合10s，溶解残余物，供GC-MS分析。

色谱条件

气相色谱条件

色谱柱：WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm；

进样口温度：250℃；

升温程序：120℃，保持2min，以15℃/min升温至250℃，再以5℃/min升温至300℃，保持5min；

载气：高纯氦气（纯度>99.999%）；

进样方式：不分流进样；

恒流模式：1.0mL/min；

进样量：1μL。

质谱条件

电离方式：电子轰击电离源（EI）；

电离能量：70eV；

传输线温度：280℃；

离子源温度：230℃；

四极杆温度：150℃；

监测方式：449.1/409.1/356.1；

溶剂延迟：5min。

色谱图或者加标回收率结果

图1. 雌三醇0.1μg/mL空白加标标准溶液图谱

表1、出峰情况

物质	保留时间	类型	峰宽	面积	开始时间	结束时间
雌三醇	14.941	M	0.048	22316	14.847	14.997

图2. 牛奶样品图谱

图3. 牛奶样品加标0.01mg/kg图谱

表2、加标回收率表

物质	加标水平	平均回收率	RSD值（n=2）
雌三醇	0.01mg/kg	94.85%	4.12%

相关产品信息

货号	产品名称	产品内容
00504-11006	SPE小柱	Welchrom® C18,500mg/6mL,30pk
00500-11006	SPE小柱	Welchrom® Silica,500mg/6mL,30pk
00824-31001	固相萃取装置	Welch 固相萃取装置，12位方缸
00821-32291	盖子+垫片	Welchrom® 预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖中心孔6mm 100pk
00821-40927	样品瓶	Welchrom® 2mL 透明短螺纹广口样品瓶带书写处 11.6*32mm 一级水解玻璃 100pk
03904-22001	气相毛细管柱	WM-5MS ,30m×0.25mm×0.25μm
00837-05006	50mL螺口尖底离心管	Welchrom® 离心管一次性离心管，平盖，锥形底,RCF12000xg,袋装,未灭菌，50mL，50/包
00826-E020S01 MMEVC	雌三醇标准品	A2S, CAS No.:50-27-1,1000µg/ml 于甲醇,1.1ml