小酌怡情，但如何检测藏在葡萄酒及其软木塞的TCA？

2020-11-29 14:38:11 默克生命科学

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作为课题骨干完成国家级、省级科研课题6项，负责完成《葡萄酒分析方法》、《白酒分析方法》、《葡萄酒用软木塞中2，4，6-三氯苯甲醚迁移量的测定方法》、《GB 5009.96-2016食品安全国家标准食品中赭曲霉毒素A的测定》等酒类食品国家/行业标准18项，授权专利2项、作为编委撰写《酒类食品安全检测方法标准操作程序》和《OIV国际葡萄酒和葡萄汁分析方法大全》2部；获中国轻工联合会、中国酒业协会科技进步奖等共8项，发表论文十余篇, 在酒类食品质量安全检测技术方面具有丰富的经验。

2,4,6-三氯苯甲醚（TCA）

是霉菌代谢含有三氯苯酚等一系列含氯的化合物经过复杂的反应后产生的化学副产物^[1]，它是一种与软木塞污染有关的化学物质。一般认为高于10 ng/L超痕量TCA就会对葡萄酒的风味和品质产生影响，使葡萄酒产生一种类似潮湿地下室或湿报纸的霉味^[2]。据报道，在已装瓶的所有葡萄酒中软木塞污染的概率为5%～7%，每年给葡萄酒工业带来巨大的经济损失。

由于这种污染主要是由封装葡萄酒的软木塞引起的，橡木塞由于其特殊的性能又很难用其他的螺旋塞等代替，因此建立一套能对葡萄酒和软木塞中TCA进行检测与定量分析精确又高效的方法就愈发的重要，从而对葡萄酒在生产和储藏过程中的每一个环节进行有效地质量控制，达到控制污染水平的目的。

样品前处理技术是葡萄酒和软木塞中TCA检测的关键，目前国内外软木塞中TCA的方法主要是固相萃取（SPE）、固相微萃取（SPME）、离子迁移谱等^[3-9]。

本文对固相微萃取技术测定TCA样品前处理条件进行研究,建立了固相微萃取-GC-ECD法测定软木塞及葡萄酒中超痕量TCA的方法，并开展了不同类型葡萄酒用软木塞和葡萄酒中TCA含量的测定，为葡萄酒企业开展葡萄酒用软木塞的测定提供有效途径。

气相色谱仪
固相微萃取头：涂层厚为100 µm的聚二甲硅烷氧烷纤维头（PDMS）(默克Supelco^®)
2,4,6-三氯苯甲醚（TCA）
2,4-二氯苯甲醚（DCA）（内标）
葡萄酒样品（厂家提供）

1.2.1葡萄酒样品测定

取5mL葡萄酒样品于20ml顶空瓶中
加入1.5 gNaCI，100μL 50μ/L的DCA标准液，压盖，进样

1.2.2软木塞处理

取10~15 个软塞子于 500 mL试剂瓶
加入300 mL12 %乙醇水溶液，使塞子完全浸没，浸泡24 h±2 h
取 5 mL 浸泡液于 20 mL 顶空瓶中，以下步骤同1.2.1

1.2.3 萃取及色谱条件

固相微萃取条件：

将顶空瓶置于恒温加热磁力搅拌器中，40℃平衡10min
将固相微萃取头插入顶空瓶，在40℃持续搅拌下萃取30min
然后在气相色谱进样口260℃解析时间：5 min

气相色谱条件：

色谱柱：5%苯基甲基聚硅氧烷毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）
柱温：初温50℃，保持2 min，以9.0℃/min升到150℃，保持1 min，以20℃/min升到260℃，保持3 min
进样口温度：260℃
电子捕获检测器温度：330℃
载气流量：1.0 mL/min
进样方式：不分流进样

采用程序升温对TCA色谱测定条件进行了优化，DCA及TCA与样品基质的干扰组分得到良好的分离见图1

2.3.1 线性范围及检出限

分别配制2.0ng/L～50 ng/L 5个不同质量浓度的TCA标准溶液，按上述确定的实验条件进行测定，质量浓度为横坐标，以TCA峰面积与DCA峰面积之比为纵坐标、绘制出测定曲线，线性回归方程y=18.947x，相关系数R² =0.9989,信噪比大于10时,定量下限为0.60 ng/L。

2.3.2回收率的测定

在软木塞浸泡液及葡萄酒中加入不同浓度的TCA标准溶液，按照实验方法测定计算方法回收率，结果如表2，TCA的回收率在80%~113.75%之间，说明说明该法具有很好可靠性和准确性。

2.3.3重复性测定

取同一样品6份按照实验方法进行测定TCA含量，计算方法相对标准偏差，结果见表2，方法的重复性小于10%，说明此方法可靠，数据准确。

按照实验方法对本次测试3种个不同类型的橡木塞及7个葡萄酒样品，标品及样品的谱图样品结果如下表3：

这3种木塞类型代表了国内葡萄酒高中低档葡萄酒的封装材料，由上表可以看出测试的原木塞没有检测出TCA，生产原木的原料控制的很好，原木经过消毒加工过程中也没有受到很多污染。1+1贴片塞检出了TCA，其遭受污染跟使用的粘合剂，加工方式，以及碎木屑的种类与碎木屑的卫生状况有关；检测的7种葡萄酒中有4种检测出TCA，说明我国葡萄酒存在一定量的TCA污染。

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