从WB的“不确定性”到HTRF的“精准狙击”：瑞孚迪 LC3B-II检测试剂盒荣登2024十大创新榜单

HTRF Human and Mouse LC3B-II Detection Kit可以对细胞裂解物中LC3B-II的表达水平进行定量检测。与Western Blot不同，该检测完全基于平板，不需要跑胶、转膜等操作。LC3B-II检测试剂盒使用两种标记抗体，一种与供体荧光团偶联，另一种与受体偶联。这两种抗体对蛋白质上不同的表位具有高度特异性。在细胞提取物中存在LC3B-II的情况下，供体荧光团与受体会互相靠近，从而产生FRET信号，其强度与样品中存在的蛋白质浓度成正比。该方法无需包被、洗板即可完成定量检测。

特异性检测LC3B-II的HTRF模型

两板法检测流程

一板法检测流程

U-87MG cells用自噬抑制剂HCQ （羟化氯喹）处理4小时，弃培养基并裂解，分别取16ul裂解物用于HTRF 及Western Blot平行检测。结果如下图所示，HTRF LC3B-II Detection Kit和Western Blot结果具有可比性且高度相关。

相关性验证

同时，近单倍体细胞HAP1 KO实验结果证实，HTRF LC3B-II Detection Kit对LC3B-II的检测具有高度特异性和选择性。

特异性验证

不同细胞密度的U-87 MG cells用mTOR 抑制剂AZD2014 (Vistusertib)处理， HTRF 及Western Blot平行对比结果显示，HTRF LC3B-II Detection Kit的检测灵敏度是Western Blot检测方法的2倍。

灵敏度验证